APOBEC3s与维吾尔族妇女宫颈癌发生发展的相关性研究

APOBEC3s not only have a wide range of antiviral activity, but is also involved in the regulation of a variety of malignant biological behavior. Recent literatures had reported that APOBEC3s family can regulate gene transcription and expression of the HPV virus, possibly by inducing the high HPV gene mutations of specific area involved in the occurrence of HPV-related cervical cancer. Continuing high-risk HPV infection is a necessary factor for cervical cancer. Using TR-PCR and Western blot technical analyses APOBEC3s family gene and protein expressing levels in Uygur women with cervical lesions; using 3D-PCR technology analyses mutant case in HPV16 DNA LCR, E2 region at APOBEC3s in vitro expression.detect mutations in HPV16 DNA LCR, E2 region in cervical lesions of APOBEC3s high expression By 3D-PCR technology, to confirm the role of APOBEC3s editing for HPV DNA in vivo, and to detect the integration state of HPV in the lesions and the expression of P53, analyze correlation of APOBEC3s and progression of cervical lesions and the role of APOBEC3s in the outcomes of HPV infection, the integration of the HPV. It enriches the knowledge of APOBEC3s about the role of antiviral HPV and the participation of Regulatory functions of cervical cancer cells; provide the basis for follow-up and treatment. of patients with HPV infection.

APOBEC3s家族不仅有广泛的抗病毒作用，而且参与了多种肿瘤恶性生物学行为的调控。最近文献报道APOBEC3s家族可以调控HPV病毒基因的转录和表达，可能通过诱导HPV基因特定区域的高突变，参与HPV相关的宫颈癌的发生。高危型HPV持续感染是宫颈癌发生的必要因素，本课题利用TR-PCR和Western blot 技术分析APOBEC3s家族各成员在维吾尔族妇女宫颈各级别病变的基因和蛋白水平表达，通过3D-PCR技术检测APOBEC3s高表达宫颈病变组织中HPV16 DNA LCR的突变情况，在体内验证APOBEC3s对HPV DNA的编辑作用，并检测病变组织中HPV的整合状态，分析APOBEC3s与宫颈病变病情进展的相关性，在HPV感染转归、整合中的作用，将丰富对APOBEC3s在HPV抗病毒、参与宫颈肿瘤细胞调控的认识；为HPV感染患者随访、宫颈癌诊治提供依据。

本项目旨在通过检测维吾尔族、汉族宫颈病变患者宫颈组织中的APOBEC3s（A3s）家族mRNA及蛋白表达水平，及其与HPV16 E2、LCR基因超突变情况的相关性，探讨A3s家族在宫颈癌发生发展中的作用。筛选出2015年1月~2017年12月在新疆维吾尔自治区人民医院妇科检出的各临床阶段宫颈病变患者455例（42.27 ± 10.46岁），HPV分型结果显示80%为HPV16阳性（364/455），宫颈癌及CIN I~III组患者88.19%为HPV16感染，且随着病程逐渐进展，组织分化程度降低，HPV16病毒载量显著升高（P < 0.05）；通过随访，HPV16型、绝经大于2年与绝经期妇女HPV持续感染相关；qRT-PCR检测A3s家族mRNA在宫颈癌各级别病变中相对表达量，结果显示A3C、A3F随着病程进展mRNA表达量显著降低（P < 0.05），A3G随着病程进展mRNA表达量显著升高（P < 0.05）；在体外构建A3s转染的SIHA细胞模型同时验证了A3C、A3F、A3G的高表达能显著减少致癌基因HPV E6基因mRNA及蛋白的表达并增强抑癌基因P53 mRNA及蛋白的表达（P < 0.05），且转染后的SIHA细胞中HPV E6基因均发现了一个错义突变位点（T178G/D32E），A3C转染组检测发现一个突变位点（C350A），提示A3s家族可能通过编辑HPV病毒突变及调控其整合进而影响宫颈癌的发生进展；对各级别宫颈病变组织中HPV E2区进行3D-PCR及测序，结果显示，随着宫颈病程的进展，超突变发生率显著升高（P < 0.05），宫颈炎组为1.43%，CIN I~III组为26.47%，宫颈癌组为42.47%，且3D-PCR二轮阳性样本中检测到了C→A及G→A碱基突变，体外构建的APOBEC3G转染的SIHA细胞模型同时检测出了3个碱基突变C3683A、C3786A、T3846C。宫颈病变组织中及转染后的SIHA细胞中均未检测到HPV LCR区的超突变。结果提示，A3C、AC3F、A3G可能参与HPV病毒感染后的复制及整合，同时使HPV16 E2基因组出现C→A及G→A碱基超突变，提示A3s家族可能通过编辑病毒使其突变致使病毒基因组不能执行正常的功能从而使机体具有抗病毒活性，为A3s家族参与调控HPV感染及宫颈癌的发生发展的机制研究提供了理论依据。