新型食管腺癌特异性结合多肽的导向功能研究及其靶分子鉴定

The incidence of esophageal adenocarcinoma(EA)caused by Barrett's esophagus (BE) is rising at an alarming rate. The tumor targeted therapy become more important as the chemo/radiotherapy resistance of EA.In previous work, we found a hepta-peptide which had EA specific binding ability. Whereby,dose this peptide can be used as anticancer drugs delivery carrier? What is the molecular target of this peptide? Is this molecular target an EA unique expression marker? And,dose it have some funcions on the development of BE to EA.For these questions, we will explore the anticancer drugs delivery ability of this peptide by Micro-PET.We will find and validate the molecular target of the peptide by LSCM,Pull-down,IP,2D electrophoresis,MS,RNAi,Gene transfection etc.. We will characterise the expression profile of this molecular target and it's potential funcions on the development of BE to EA by tissue microarray ,IHC,RNAi or Gene transfecions.These studies will give more hints for EA tumor targeted therapies and the mechanism studies of BE malignant transformation to EA.

Barrett食管（BE）引发的食管腺癌（EA）发病率不断上升。由于 EA对于放化疗不敏感，靶向治疗成为重要选择，但缺乏特异性肿瘤标志物。前期工作中，我们应用EA细胞筛选获得一条新的能够与其高亲合力结合的七肽，且该肽能与EA组织特异结合。那么该七肽是否具有抗肿瘤药物导向肽的应用价值？七肽结合的靶分子是什么？该靶分子具有什么生物学意义？为了回答以上问题，本课题拟利用Micro-PET技术，结合不同的抗肿瘤药物，深入研究该肽的抗肿瘤药物导向能力；利用激光共聚焦，噬菌体亲和Pull-down，多肽免疫共沉淀，肽库筛选，2D电泳，质谱，RNA干涉，基因转染，组织芯片，免疫组织化学等技术寻找和鉴定该肽的靶分子，研究靶分子的表达情况以及在BE恶变过程中的生物学意义。本课题将为EA的靶向治疗和多肽导向抗肿瘤药物研究提供新的借鉴，为七肽的应用提供理论依据，为EA肿瘤标志物和发生发展机制研究奠定基础。

Barrett 食管（BE）引发的食管腺癌（EA）发病率不断上升。为了利用分子成像技术对BE食管引发的EA进行早期诊断。前期，我们应用噬菌体筛库技术获得一条能够与食管腺癌组织特异结合的小肽（SNF*）。然而，该小肽结合的靶分子是什么？该靶分子具有什么生物学意义？仍然未知。寻找该小肽（SNF*）的靶分子，确定靶分子的生物学意义，以及开发该小肽的肿瘤药物靶向功能是本课题的主要目标。. 本课题中，我们通过小肽的Pull Down实验，结合质谱鉴定确定了SNF*小肽的靶分子是上皮细胞粘附分子（Epithelial cell adhesion molecule，EpCAM）；在EpCAM高表达细胞敲减EpCAM（siRNA）表达，SNF*小肽结合性明显下降，而在EpCAM低表达细胞过表达EpCAM则可以明显增加SNF*小肽的结合性；同时竞争实验、荧光偏振实验、激光共聚焦扫描显微镜分析等均说明了SNF*小肽与EpCAM具有特异结合性。文献报道EpCAM是多种上皮来源肿瘤（结肠癌，乳腺癌，胃癌，胰腺癌）的特异性肿瘤标志物，我们通过组织芯片的分析也确定了EpCAM在结肠癌，乳腺癌，胰腺癌和胃癌表达率在90%以上。鉴于EpCMA在多种肿瘤组织广泛表达，我们收集了新鲜结肠癌（43例），乳腺癌（28例），胰腺癌（24例）和胃癌（22例）组织，进行了SNF-FITC染色，结果证明SNF-FITC探针能够特异性与以上肿瘤组织结合，能够与EpCAM抗体共定位。此外，利用乳腺癌，结肠癌裸鼠移植瘤模型我们又证明了SNF小肽的体内肿瘤特异结合性，并且证明了SNF小肽能够导向阿霉素对上述肿瘤进行靶向治疗。. 本课题最终证明了前期发现的食管腺癌特异性结合小肽的靶分子是EpCAM，并且证明该小肽能够特异结合多种EpCAM高表达的肿瘤组织，为分子成像技术对肿瘤的早期诊断提供了一种广谱性的分子探针，也为肿瘤的靶向治疗提供的新的契机。本课题至结题时（2016年12月）共发表SCI论文2篇（标注1篇），申请国家发明专利一项（已受理），培养博士后、硕士研究生各一名。此外，以本课题研究结果的为主要内容的论文已撰写完毕，预计在2017年4月投稿。在本课题研究基础上，申请人继续获得了新的面上项目支持（81673020，负责人李萌）。