石斑鱼凋亡抑制因子Bax inhibitor 1（BI-1）在虹彩病毒SGIV侵染中的功能研究

Bax inhibitor 1 (BI-1) is a kind of key apoptosis suppressor，play important roles in the regulation of apoptosis. And the involvement of BI-1 in host immune response to virus infection has been proved in recent study. However, the functions of fish BI-1 are still unknown. In this study, we try to clone the grouper BI-1 gene on the basis of EST screened from grouper splenic transcriptome library. Then the effects and mechanisms of grouper BI-1 on SGIV induced apoptosis and virus replication will be investigated through over-expression, RNAi, flow cytometry, confocal microscopy, Co-IP,etc. The results will be beneficial to further understanding the mechanisms of immune responses in fish during virus infection, and provide new strategies and molecular targets for prevention of fish viral disease.

Bax inhibitor 1（BI-1）是真核细胞中一类关键的凋亡抑制因子，在细胞凋亡的调控中发挥着重要的作用，近期有研究表明BI-1还参与了宿主应对病毒侵染的免疫反应，然而目前还未见鱼类BI-1基因相关功能的研究报道。本项目拟利用石斑鱼脾脏转录组文库中筛选得到的EST克隆石斑鱼BI-1基因，并进一步通过体外过表达、RNA干扰、流式细胞、共聚焦显微镜及免疫共沉淀等技术研究BI-1对虹彩病毒SGIV诱导细胞凋亡的调控作用及其对病毒感染复制的影响，系统地分析BI-1在病毒侵染中的功能与作用机理。研究结果不仅有助于我们进一步了解鱼类在病毒感染过程中的免疫应答机制，而且为鱼类病毒病防治提供新的策略与分子靶标。

新加坡石斑鱼虹彩病毒（SGIV）是我国南方养殖石斑鱼主要的病毒性病原，且SGIV感染能诱导细胞凋亡。Bax inhibitor 1（BI-1）是真核细胞中一类关键的凋亡抑制因子，然而目前还未见鱼类BI-1基因在SGIV感染复制过程中作用的相关报道。本项目利用RACE-PCR、体外表达、荧光定量PCR与酵母双杂交等技术获得以下结果：1）获得了石斑鱼BI-1基因，该基因在健康石斑鱼的脾脏及体肾中表达量较高，且SGIV感染后GS细胞中该基因表达上调；2）石斑鱼BI-1基因过表达能够抑制SGIV感染诱导的细胞凋亡、Caspase3的活性以及SGIV基因的转录，且该基因C端的结构域发挥了关键作用；3）石斑鱼BI-1能与石斑鱼BNIP3在体外相互作用；4）鉴定得到了石斑鱼BNIP3基因，该基因在健康石斑鱼的心脏及脾脏中表达量较高，且SGIV感染后GS细胞中该基因表达上调；5）石斑鱼BNIP3基因过表达能够促进SGIV感染诱导的细胞死亡、抑制病毒基因的转录。获得的结果对深入了解石斑鱼BI-1在SGIV感染过程中的作用机理提供了参考，也为鱼类病毒病防控策略的制定提供了理论支撑。