骨桥蛋白在树突状细胞对乙肝病毒识别中作用的研究

Most of hepatic fibrosis and hepatocellular carcinoma were developed from chronic hepatitis B (CHB). However, hitherto the mechanism of CHB is still not fully understood. Immaturity and dysfunction of antigen presentation of dendritic cells (DCs) plays a vital role in ineffective clearance of hepatitis B virus （HBV） in CHB patients, which mechanism is urgently to be clarified. Osteopontin (OPN), a cytokine, plays an important role in many infectious diseases. In our previous research, we found that surface molecules on DCs and cytokines secreted by DCs were influenced by the level of OPN, so we speculate OPN participates in maturity of DCs and antigen presentation of HBV. Therefore, in this study, firstly we will investigate the relationship of them the relationships between OPN and the maturity and function of DCs through detecting samples of CHB patients. Then, by blocking OPN and administering HBV antigens stimuli in vitro, we will study the function and mechanisms of OPN in regulation of DCs function and T cells development. Furthermore, we will explore the mechanism by means of OPN knockout mice, HBV transgenic mice and by blocking with antibodies in vivo and in vitro. This research aims to explore the mechanism of CHB and provide theoretical basis to find out some molecular therapeutic targets.

慢乙肝是肝硬化和肝细胞癌的主要病因，且乙肝慢性化机制不甚明了。树突状细胞（DC）的成熟障碍和抗原提呈功能缺陷是机体无法发挥免疫清除效应的主要原因之一。阐明DC功能的调节机制是治疗慢乙肝的迫切需要。骨桥蛋白（OPN）作为一种细胞因子,参与多种感染性疾病的发生发展。我们前期研究发现乙肝病毒刺激后DC的表面分子表达、细胞因子产生与OPN水平相关，因此推测OPN参与了DC的成熟及对乙肝病毒抗原的提呈作用。本课题首先利用OPN基因敲除小鼠、乙肝病毒转基因小鼠、抗体阻断OPN功能等进行体内、体外实验，研究乙肝病毒抗原刺激后OPN对DC成熟、抗原提呈及诱导T细胞分化的调节作用及机制。其后，利用慢乙肝患者样本检测OPN与DC成熟及功能的关系，通过阻断OPN、体外乙肝病毒抗原刺激等方法，研究乙肝病毒感染后OPN对人源DC功能的调节作用，为阐明慢乙肝的发病机制，寻找有效的分子治疗靶点提供理论基础。

树突状细胞（DC）的成熟障碍和抗原提呈功能缺陷，是机体不能发挥免疫清除效应的主要原因之一。阐明DC功能的调节机制是治疗慢乙肝的迫切需要。骨桥蛋白（OPN）作为一种细胞因子,参与多种感染性疾病的发生发展过程。本课题利用慢乙肝患者样本检测OPN与DC成熟及功能的关系；通过阻断OPN、体外乙肝抗原刺激等方法，研究乙肝病毒感染后OPN对人源DC功能的调节作用。其后，利用OPN基因敲除小鼠、抗体阻断等手段进行体内、体外实验研究乙肝病毒抗原刺激后OPN对DC成熟及抗原提呈诱导T细胞分化的调节作用及机制。我们发现，慢性乙肝患者DC产生OPN的量明显低于健康志愿者。我们发现乙肝病毒刺激后DC的表面分子表达与细胞因子的产生与OPN水平有关。在HBV抗原刺激DC时，OPN的缺乏影响DC的IL-12的生产和DC表面共刺激分子的表达。DC功能缺陷导致了对HBV 抗原的Th1反应的降低。此外， DC中OPN的缺失，降低了HBV抗原诱导的小鼠肝脏炎症反应。更重要的是，在体外培养中OPN可以大大促进CHB患者的DC成熟。也发现OPN可明显促进外周血单个核细胞产生IP-10，加重炎症反应。刀豆蛋白A（ConA）诱导的肝炎是一种暴发性肝损伤的小鼠模型，OPN的增加是造成ConA诱导肝损伤的重要原因，ConA肝炎中肝脏中OPN主要来源于活化的自然杀伤性T（NKT）细胞。在小鼠注射ConA前口服病原菌或庆大霉素，致病菌的给予加剧了肝脏的损害，而庆大霉素可以减轻肝损伤。在ConA诱导的肝炎中致病菌可以下调活化的NKT。另外，在我们的实验中，肝脏NKT的数量和肝损伤的程度呈负相关。此外，病原菌处理的ConA肝炎组肠道DC明显增加。派氏淋巴结和肝脏的DC的活化状态与肠道DC相似。病原菌干预促进了肝脏及肠道中中OPN水平的升高。然而，肠道革兰阴性菌的清除可以减轻ConA诱导的肝损伤，通过抑制肝脏NKT细胞活化和DC在肝脏和小肠的归巢。体外实验表明，病原菌刺激DC启动了NKT细胞杀伤肝实质细胞的作用。这些结果表明，OPN可以启动DC对抗原的免疫反应以及增强DC的成熟和功能，可能对于进一步提高DC疫苗的效果发挥作用。