基于FSH/cAMP-PKA信号转导通路的针刺调控卵巢储备功能的效应机制研究

Diminished ovarian reserve (DOR), a major reason for female infertility, severely affects women’s reproductive health and fertility. Hormone replacement therapy commonly used in morden medicine, can improve clinical symptoms of DOR, however, it cannot improve ovarian reserve and female fertility. Besides, it leads to obvious adverse events. The previous work of our team and literatures indicate acupuncture is effective for the treatment of DOR, while few researches were done on the mechanism of acupuncture for DOR. The hypothalamus-pituitary-ovarian (HPO) axis and the ovarian FSH/cAMP-PKA signal transduction pathway are the key to ovarian reserve. This project combines the animal and clinical researches. After acupuncture intervention, changes in the reproductive endocrine hormone levels in the hypothalamus, pituitary and ovarian, ovarian tissue morphology, number of follicles at different levels, and the target protein and mRNA expression of the ovarian FSH/cAMP-PKA pathway are measured by Elisa, Western blot or Real time PCR, as appropriate. By doing so, we want to explore the effect mechanism of acupuncture for DOR through the following two aspects: the overall neuroendocrine regulation of HPO axis, and the local ovarian regulation of FSH/cAMP-PKA pathway. The objective of this project aims to provide an effective therapeutic method to improve female reproductive health and fertility.

卵巢储备功能下降（DOR）是女性不孕的重要原因，严重影响女性的生殖健康和生育能力。现代医学常用的激素替代疗法可较好的改善临床症状，却无法改善卵巢储备功能、提高生育能力，且副作用明显。课题组前期工作和大量临床试验表明针刺治疗DOR具有良好效果，但针刺作用机理研究缺乏。下丘脑-垂体-卵巢轴（HPO轴）和卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA信号转导通路是影响卵巢储备功能的重要环节。本项目采用动物实验和临床试验相结合方式，运用酶联免疫、蛋白印迹及实时定量PCR等方法，观察调冲任安神志针刺法干预DOR后下丘脑、垂体及卵巢生殖内分泌激素水平、卵巢组织形态及各级卵泡数量及卵巢FSH/cAMP-PKA通路效应蛋白和mRNA表达的变化，从HPO轴的内分泌整体调节和卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA 信号通路的局部调节两方面，探讨针刺治疗DOR的作用机制，为改善女性生殖健康和生育能力提供有效方法。

卵巢储备功能下降（DOR）是女性不孕的重要原因，严重影响女性的生殖健康。现代医学尚无有效的措施可以改善卵巢功能。临床研究和课题组前期工作表明针刺治疗DOR具有良好疗效，但针刺作用机理不明。下丘脑-垂体-卵巢轴（HPO轴）和卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA信号转导通路是影响卵巢储备功能的重要环节。本项目基础和临床相结合，运用酶联免疫、蛋白印迹及实时定量PCR等方法，观察针刺干预自然衰老DOR模型大鼠下丘脑、垂体及卵巢生殖内分泌激素水平、卵巢组织形态及各级卵泡数量及卵巢FSH/cAMP-PKA通路效应蛋白和mRNA表达的变化，从HPO轴的内分泌整体调节和卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA 信号通路的局部调节两方面，探讨针刺治疗DOR的作用机制；临床研究采用随机对照试验评价针刺治疗DOR的有效性，为改善女性生殖健康和生育能力提供有效方法。基础研究发现：（1）与3月龄SD大鼠相比，9月龄SD雌性大鼠动情周期紊乱、子宫和卵巢指数减小，血清FSH升高，E2和AMH降低，AFC减少，提示其卵巢功能明显减退，符合DOR的临床改变，可作为DOR的动物模型。（2）与模型组相比，针刺干预后DOR大鼠血清FSH水平显著降低，AMH和E2水平显著升高，下丘脑GnRH水平显著降低，提示针刺可有效调整DOR模型大鼠紊乱的HPO轴。（3）与模型组相比，针刺干预后卵巢组织FSHR受体和mRNA、cAMP、P450mRNA和PKA表达量增加，提示FSH/cAMP-PKA信号转导通路参与针刺疗效的发挥。临床研究由于课题尚未完成，用于统计的样本量较小，目前仅观察到针刺组随访时DOR患者窦卵泡计数较基线显著升高；针刺组治疗后和随访时FSH/LH比值正常率较基线显著升高；治疗后针刺组FSH/LH比值正常显著高于对照组。但令人惊喜的是，针刺组7例患者、对照组12例患者在试验期间获得临床妊娠，临床妊娠率23%。以上提示针刺治疗DOR具有很大潜力。本项目研究结果初步表明针刺治疗DOR 具有一定疗效； HPO轴的整体调节和卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA 信号通路的局部调节参与了针刺作用的发挥。