基于雌激素受体途径的杜仲心血管保护作用机制研究

雌激素效应异常与许多疾病的病理过程密切相关，但长期使用雌激素会带来一些不良反应。植物雌激素因疗效确切、毒副作用小而倍受关注，从中药中发掘植物雌激素具有潜在的应用和开发价值。本项目将根据已有的工作基础，以杜仲为研究目标，利用已建立的雌激素活性筛选及评价平台考察杜仲雌激素样活性；综合运用RT-PCR、Western blot、流式细胞术、组织病理学等方法，体外以雌激素受体作用的血管平滑肌细胞（VSMC）、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、单核巨噬细胞Raw264.7细胞为研究对象，探讨杜仲雌激素样活性成分在心血管保护作用中的机理和细胞差异性，明确其作用途径；体内利用4-乙烯基环己烯双环氧化物诱导的小鼠更年期动脉粥样硬化模型为研究对象，进一步考察其雌激素样活性成分的血管保护作用，阐明基于ER途径的杜仲心血管保护作用机制，为杜仲作为植物雌激素在临床的安全应用提供实验和理论依据。

本研究首先采用报告基因、荧光偏振技术，研究杜仲雌激素活性成分及其雌激素受体亚型选择性分子机制；其次，采用E-screen实验、实时定量RT-RCR、激光共聚焦技术，考察了杜仲雌激素样活性成分的作用机制；再次，以离体动脉环和培养的大鼠血管平滑肌细胞为模型，观察了方中活性成分的血管保护作用；同时建立了4-VCD诱导的小鼠围绝经期动物模型，并初步考察了含有杜仲的中药复方防治围绝经期综合症的机制。.结果表明从杜仲中分离得到了七个化合物表现出雌激素样活性，主要有松脂醇单葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷，桃叶珊瑚苷，千叶素A和α-氧-β-D-葡萄吡喃糖基- 4, 2’,4’-三羟基二氢查耳酮。进而利用离体心脏、Raw64.7细胞考察了雌激素样活性成分的血管效应，结果证实杜仲以剂量依赖的方式介导血管舒张，用内皮缩血管肽-1预收缩血管，与阳性对照药SNP相比，杜仲(10mg/ml)、汉黄芩素10µM和木蝴蝶素-A10µM均能降低灌注压，杜仲介导的血管舒张不能被L-NAME(一氧化氮抑制剂)抑制，但是能被四乙基铵(钾通道阻滞剂)完全抑制。用H2O2处理内皮细胞细胞，发现NOX-4、TNF-α和COX-2的 mRNA高表达。用汉黄芩素可以降低由H2O2介导的氧化应激中CAT、SOD-1和GSR的mRNA表达。证实杜仲粗提物、杜仲组分6、木蝴蝶素-A和汉黄芩素能在离体心脏灌流体外试验中舒张冠状动脉并改善心脏功能，这一作用是内皮依赖的，但不是NO介导的。细胞实验表明汉黄芩素能通过清除活性氧产生血管和细胞的保护作用。在LPS诱导的炎症细胞模型中，黄芩素可显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞NF-κBp65转位和IκBα磷酸化的，这种作用可被NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082或ICI182,780所拮抗，说明Baicalein可通过抑制NF-κBp65转位和IκBα磷酸化的发挥抗炎作用。在上述研究的基础上，我们采用4-VCD诱导的小鼠围绝经期模型，考察了含有杜仲雌激素样活性成分的中药复方能够提高围绝经期小鼠模型子宫湿重和血清E2水平，具有改善围绝经期综合症的作用。.综上所述，杜仲具有雌激素样活性，能够雌激素受体依赖的发挥血管舒张和抗炎活性，并能够发挥防治围绝经期综合症的作用，为杜仲的进一步开发研究提供了借鉴和支持..发表论文5篇，其中SCI 3篇，培养研究生2名。