Dysbindin 在精子顶体形成中的作用

Dysbindin是溶酶体相关细胞器生物发生复合体-1(BLOC-1)的一个亚单位，已报道在黑素体，血小板致密颗粒等溶酶体相关细胞器(LRO)的形成中起重要作用。顶体位于精子头部，是一种LRO，在精卵结合时发生顶体反应，启动受精。迄今关于dysbindin在睾丸中的报道很少，其作用不明确。最近研究表明RNF151，一种睾丸特异性高表达蛋白，与dysbindin有直接相互作用。RNF151是锌指蛋白家族的一个成员，可能参与精子发生，这提示dysbindin在顶体的形成中可能起作用。我们在前期研究中观察到dysbindin缺失突变小鼠sdy的繁殖能力明显较野生型弱，推测可能由于dysbindin缺失影响了顶体的形成进而影响精子的受精能力。本课题将以独特的sdy突变体为研究对象，用形态学及分子生物学等手段，研究dysbindin在精子顶体发生中的作用，为男性不育的发病机理提供新的认识。

中文摘要: . Dysbindin是溶酶体相关细胞器生物发生复合体-1的一个亚单位，在溶酶体相关细胞器(LRO)的形成中起重要作用。顶体是位于精子头部的一个LRO，内含多种水解酶和基质分子，在精卵结合时发生顶体反应，释放顶体内容物，启动受精。顶体形态或功能异常是精子功能受损的重要原因之一。到目前为止，精子顶体形成的分子机制还不明确。我们在前期研究中发现dysbindin缺失突变小鼠sdy的繁殖能力减低。关于dysbindin在睾丸中的作用研究报道极少。本课题欲从囊泡运输的角度研究dysbindin在小鼠精子顶体形成中的作用，为进一步研究男性生育力下降的机制提供一个新的思路。. 我们以野生型小鼠（DBA）和dysbindin 缺失突变小鼠sdy为研究对象，用血细胞计数板对小鼠精子进行计数，用计算机辅助精液分析系统（CASA）检测精子活力；我们用钙离子载体A23187诱发顶体反应，观察DBA和sdy精子顶体反应发生率有无差异；用体外受精技术进一步证实sdy 精子的功能受损；我们用免疫组织化学等技术观察dysbindin在野生型小鼠睾丸组织中的表达与分布，用电镜技术观察sdy精子细胞顶体发育过程中形态演变是否异常；用分子生物学等手段寻找dysbindin缺失后小鼠生育力下降的可能分子机制。. 研究结果发现dysbindin缺失后sdy小鼠繁殖力下降（约50%），精子体外受精能力减低（约50%）。我们检测了sdy小鼠的精子数量、运动能力、顶体反应发生率等均未发现明显异常。我们进一步观察顶体形成的形态演变过程及成熟精子的形态结构，sdy小鼠和野生型小鼠相比也无明显异常，这些结果说明dysbindin缺失并不影响小鼠精子数量、活力和顶体结构的形成。进一步研究发现sdy睾丸组织中sp56的表达减少（约50%），已知sp56是一种顶体基质分子，是卵细胞外透明带蛋白ZP3的结合蛋白，受精时将精子粘附到卵细胞透明带上。这提示dysbindin 不是顶体形态形成必需的，但可能影响顶体内sp56分子的转运，从而影响雄性小鼠的生育能力。. 我们的初步研究结果提示dysbindin缺失可能为男性生育力下降的发病机理提供新的分子机制，sdy小鼠可能成为研究雄性生育力下降的动物模型。