OLA1基因在乳腺癌转移过程中的作用及分子机制

乳腺癌是我国常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌发生浸润转移和术后复发是制约其治疗效果的主要因素。然迄今对乳腺癌转移的具体分子机制尚待深入研究。本研究拟对在前期工作首次发现的与乳腺癌转移密切相关的OLA1基因进行体内外的深入研究，运用基因芯片和蛋白芯片对高表达或knockdown OLA1基因的乳腺癌细胞进行差异表达分析，及酵母双杂交技术筛选关键蛋白，分析OLA1基因在乳腺癌转移过程中的作用和相应的分子机制，以及与ROS信息通路的关系，并进一步在裸鼠乳腺癌转移模型、人乳腺癌原发灶和肺转移灶组织中进行验证。本课题对进一步阐明OLA1基因在乳腺癌的浸润转移机制，进一步明确乳腺癌发生、转移及提高乳腺癌患者的生存期限和生活质量有重要意义。

通过三年的研究和探索，本课题紧紧围绕项目研究方案和技术路线实施，基本完成预定设想和目标，主要完成情况和取得成果汇报如下：首先我们测定多种乳腺癌细胞系OLA1的mRNA和蛋白表达情况，并构建高表达和低表达细胞系，进行细胞迁移和侵袭实验，结果表明高表达OLA1的细胞与对照细胞无明显差异，OLA1 knockdown细胞的受诱导趋向侵入能力显著下降，且对细胞迁移和侵入的影响并不是由于对细胞周期和生长的直接改变而引起的。运用Affymetrix基因芯片进行差异统计学分析并进行了验证。通过构建含OLA1的重组逆转录病毒载体，将OLA1 shRNA序列克隆到逆转录病毒载体pLXSN中，生产重组逆转录病毒并感染乳腺癌细胞MDA-MB-231，构建成功特异的cDNA文库。以Clontech公司酵母双杂交技术为平台，构建酵母OLA1杂交筛选系统，筛选OLA1下游的靶蛋白，目前已得到十余个阳性克隆，接着分别进行序列分析和比对，已鉴定得到两个靶蛋白BRCA1及γ-tubulin。通过分子生物学手段已初步阐明调控的相关分子机理。 另外，ROS 作为信号传导的中介，参与了肿瘤转移的多个环节包括肿瘤细胞迁移和侵入。而 OLA1 对细胞内的 ROS 水平具有非常迅速的调节作用，我们的研究结果也表明OLA1通过调控 ROS 参与了乳腺癌细胞转移过程。其影响乳腺癌细胞浸润和转移的最终效应可能与细胞骨架蛋白调控相关，尤其是纺锤体和中心粒及F-actin的聚合和解聚密切相关。进一步的体内动物实验和人体组织标本也初步验证了上述研究结果的正确性。. 本项目取得的阶段性研究成果：已发表国际学术论文3篇，其中SCI两篇，国内核心期刊3篇，另有一篇论文已向国际学术期刊投稿。人才培养方面：已有1人获得中青年人才培养计划资助，参加国内学术会议交流2次，主要参与者赴美国知名研究机构学习，并参加国际学术会议1次。主要培养博士研究生2位，硕士研究生2位。