家蚕雌不育无脚突变ap的分子解析及其基因调控研究

The reproductive system and appendages are significant for insect survival and proliferation. Hox genes are one type of important gene family regulating organism development. Its precise temporal-spatial expression determines morphology of different segments in insect. Alter the expression patterns of Hox gene will lead to developmental abnormalities in tissues and organs, such as appendages and the reproductive system. Therefore, Hox genes require the precise regulation of upstream genes to maintain their normal expression pattern, and further regulate specific target genes to control the normal development of organisms. However,the molecular mechanism of regulation network is not very clear. The silkworm mutant ap display female infertility and no thoracic legs at the larval and adult stage compared to the wild type ,of which the phenotype is very similar to that of Hox gene mutation. Our previous studies initially confirmed that a candidate gene Bmap for ap mutant induced the abnormal expression of Hox genes. Therefore, we try to explore how Bmap regulate Hox genes expression pattern by using the ap mutant, and identify the key target genes regulated by Hox genes and Bmap gene during the female genital development. This project would not only play an important role in understanding the regulation mechanism of Hox genes expression and as well as gene network for the tissues and organs development, but also lay molecular basis for the female infertility genes utilization in Lepidoptera pest control.

生殖系统和附肢对昆虫生存和繁衍具有重要意义。目前已知Hox基因作为生物体内一类重要的发育调控基因家族，其精确的时空表达决定着昆虫各体节的形态特征。改变Hox基因表达模式会引起附肢和生殖系统等重要组织器官发育异常。因此，Hox基因需要其上游基因的精密调控来维持自身正常的表达模式,进而调控特定的靶基因控制生物体的正常发育，但该调控网络的分子机制并不十分明了。家蚕ap突变表现为雌性不育，无胸足，其表型与Hox基因突变的表型极为相似。我们前期研究初步证实：家蚕ap突变的候选基因Bmap调控了Hox基因的异常表达。因此本研究将利用该突变研究Bmap基因如何调控Hox基因的表达模式，并鉴定Bmap和 Hox基因在雌性生殖器发育中调控的关键靶基因。本项目的实施对深入了解Hox基因的表达调控及其对组织器官的发育调控机理具有重要意义，同时也为将雌不育基因用于鳞翅目害虫的生物防治奠定分子基础。

生殖系统和附肢对昆虫生存和繁衍具有重要意义。目前已知Hox基因作为生物体内一类重要的发育调控基因家族，其精确的时空表达决定着昆虫各体节的形态特征。改变Hox基因表达模式会引起附肢和生殖系统等重要组织器官发育异常。因此，Hox基因需要其上游基因的精密调控来维持自身正常的表达模式,进而调控特定的靶基因控制生物体的正常发育，但该调控网络的分子机制并不十分明了。家蚕ap突变表现为雌性不育，无胸足，其表型与Hox基因突变的表型极为相似，为我们研究Hox基因调控家蚕组织器官发育的分子网络提供很好的研究材料。我们研究证实： ap 突变雌蛾不育性原因是交配囊退化；通过定位克隆，鉴定了导致ap突变形成的基因为转录因子Bmsob基因，成功克隆了Bmsob 的全长 cDNA。通过比较Bmsob在大造（DZ）和ap突变体在胚胎期和蛹期的表达情况，发现Bmsob基因在ap突变中的表达量均显著低于大造，近似于沉默状态；通过Crispr/Cas9技术敲除Bmsob基因，家蚕的幼虫胸足和翅发育缺陷，证实该基因在附肢和翅发育中必不可少。同时证实家蚕Hox基因成员BmAntp、BmUbx和BmAbd-B基因在ap突变中均显著下调表达。通过基因芯片，成功筛选到Bmsob基因的下游调控基因BmDsp和BmPc，并通过EMSA证明Bmsob基因既能够直接地抑制Hox基因的表达，又能够通过抑制BmDsp和BmPc等基因间接的抑制Hox基因的表达，从而调控家蚕胸足、翅和生殖腺的发育。本项目的实施对深入了解Hox基因的表达调控及其对组织器官的发育调控机理具有重要意义，同时也为将雌不育基因用于鳞翅目害虫的生物防治奠定分子基础。