内皮源性雌激素信号介导脉络膜新生血管的作用及机制研究

Choroidal neovascularization(CNV) is the major cause of visual impairment among AMD patient. Despite recent evidence suggested that angiogenesis factors play critical role in regulating CNV formation, it is still necessary to further reveal which angiogenic factors are involved. Estrogen is a steroid hormone, which can be synthesized by multiple tissue cells and has important role locally. However, whether the cells in the eyes have the function of synthesizing estrogen and play a role in intraocular diseases remain unclear. Our previous study founded that inflammatory stimulation can promote the synthesis of estrogen in choroidal vascular endothelial cells(ChEC) and estrogen can promote the proliferation, migration and tube formation of ChEC. We thus hypothesize that inflammation enhances the secretion of estrogen, which induces the formation of CNV. To confirm this hypothesis, we tend to study the regulation mechanism of estrogen synthesis in ChEC and to elucidate the mechanism of estrogen promoting CNV formation by using the techniques of molecular biology such as gene knockout and Chromatin Immunoprecipitation in vitro and in vivo. This project will provide new insight into the pathogenesis of CNV and provide new ideas for the prevention and treatment of CNV.

脉络膜新生血管（CNV）是导致老年黄斑变性患者视力损害的主要原因，其发病机制多认为与血管生成因子的作用有关。但具体有哪些血管生成因子参与其中仍有待进一步揭示。雌激素属于甾体类性激素，可由多种组织细胞合成分泌，并在局部发挥重要的病理生理作用。但眼内局部是否具有合成雌激素的功能，并参与眼内疾病发生发展尚不清楚。在前期工作中我们发现，炎症刺激可促进脉络膜血管内皮（ChEC）合成分泌雌激素，并且雌激素具有促进ChEC增殖、迁移和小管形成的生物学作用。我们据此推测：炎症微环境可诱导ChEC合成分泌雌激素信号，雌激素作为血管生成因子参与介导CNV形成。为证实这一假说，我们拟通过体外细胞和动物模型，运用基因敲除、染色质免疫共沉淀等分子生物学技术研究ChEC合成分泌雌激素的调控机制，阐明雌激素促进CNV的作用机理。本项目将揭示雌激素作为一种血管生成因子介导CNV的新机制，并将为CNV的防治提供新的思路。

脉络膜新生血管（CNV）是导致老年黄斑变性（AMD）患者视力损害的主要原因，尽管目前普遍采用的抗VEGF药物可以使部分患者的视力得到一定程度改善，但仍存在长期使用后导致治疗抵抗以及副作用等问题，因此有必要进一步探索额外的治疗靶点与抗VEGF 联合用药，以期达到提升后者的治疗效果，降低用药时间以及副作用等治疗目的。雌激素（estrogen）是一类具有环戊烷多氢菲母核结构的甾体性激素。已有研究表明，在小鼠体内补充雌激素可以促进CNV的形成，但其机制迄今尚未完全阐明。近年来，炎症信号途径在AMD的发生发展以及CNV形成中的作用受到广泛关注，IL-8是一个主要由巨噬细胞和单核细胞分泌的促炎性细胞因子。已有研究表明，视网膜色素细胞（RPE）在氧化应激损伤的情况下，可大量释放IL-8，但截至目前尚未有研究报道IL-8在CNV中可能发挥的作用以及雌激素是否可能通过IL-8作用诱导CNV形成尚不清楚。本项目围绕雌激素对血管内皮细胞IL-8表达的影响以及IL-8对CNV的作用及机制问题开展研究，主要取得以下主要成果：1）通过在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）模型中，施加雌激素处理，采用RT-qPCR检测IL-8 mRNA表达水平，发现雌激素可上调IL-8 mRNA表达。2）在人脉络膜血管内皮细胞（hCEC）模型中，通过采用CCK-8、伤口愈合以及小管形成实验证实IL-8具有促进hCEC迁移和内皮小管形成的作用。3）利用免疫荧光、westernblot等实验证实IL-8可能通过CXCR1/2介导下游FAK、Src激活促进hCEC迁移的分子机制。本项目研究成果可为后续从整体水平探讨雌激素/IL-8途径在CNV中的作用以及最终临床干预湿性AMD的进展提供理论基础和实验依据。