趋化因子CCL21-CCR7生物学轴诱导肝门部胆管癌微转移及其机制

针对肝门部胆管癌根治性切除术后复发率高，且主要沿胆管壁血管、神经、淋巴结局部转移很少远处转移的现状。在前期研究肝门部胆管癌转移及存在CCR7表达基础上，提出肝门部胆管癌是否存在微转移，趋化因子CCL21-CCR7生物学轴是否通过淋巴微转移、血管生成拟态和神经微转移诱导了肝门部胆管癌转移的假说。用免疫组化和分子生物学的方法，从临床水平、细胞水平和动物模型分子水平进行研究，验证在肝门部胆管癌中微转移的存在及与CCR7的相关性。探讨CCL21-CCR7生物学轴诱导微转移的作用以及在淋巴微转移、血管生成拟态和神经微转移三方面的诱导机制。尝试初步建立肝门部胆管癌的微转移检测机制，为术中确定肿瘤切除范围、术后病情分析、预后评估和选择术后个体化治疗方案提供依据；应用CCR7沉默技术在肝门部胆管癌可能转移的早期进行干预、为进一步降低复发率的治疗提供理论支持。

背景 胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，为肝胆系统除肝癌以外最为常见的肿瘤，其中肝门部胆管癌约占50%。目前虽然采用扩大肝切除、肝门高位切除并肝门实质-空肠吻合术等方法扩大局部切除范围，提高了根治性切除率，但术后复发率仍然很高。国内外研究发现淋巴转移、血管生成、神经浸润促进了肝门部胆管癌根治术后的转移和复发，而CCL21-CCR7生物学轴在多种肿瘤转移中起到重要的作用。研究内容 检测肝门部胆管癌淋巴微转移、血管生成拟态、神经微转移及CCR7的表达，并分析其与临床病理参数的关系，并通过细胞学实验阐明CCL21-CCR7轴对胆管癌细胞体外增殖、迁移能力及侵袭能力的影响；动物实验验证CCL21- CCR7生物学轴通过淋巴微转移、神经微转移和血管生成拟态诱导肝门部胆管癌微迁移和侵袭；通过基因芯片以及基因测序技术，筛选肝门部胆管癌侵袭、转移相关促进及抑制性因子并研究其作用机制。重要结果及其科学意义 实验证实胆管癌标本的阴性切缘及淋巴神经组织存在淋巴结微转移、神经浸润及血管生成拟态；CCR7和血管生成拟态的表达与患者的淋巴结转移、肿瘤分化程度明显相关，且CCR7是影响患者术后生存率的独立性因素；体外实验证实CCR7可促进QBC939细胞的侵袭、转移，增强其血管生成拟态形成能力，且CCL21能够协同CCR7增强上述生物学过程。CCR7与Twist1表达呈正相关，CCR7可能通过影响Twist1表达进而调控肝门部胆管癌细胞上皮细胞-间质细胞转化，影响肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭。提示CCR7可作为肝门部胆管癌患者治疗的新靶点。TROP2表达水平与肝门部胆管癌患者预后呈负相关，为预后的独立影响因素，因此TROP2可能为判断肝门部胆管癌患者预后的潜在临床指标。FGFR4表达量与肝门部胆管癌转移明显相关，为影响患者预后的独立因素；且FGFR4可促进胆管癌细胞侵袭、迁移及上皮细胞-间质细胞转化，而FGFR4抑制剂能明显逆转上述过程，这为肝门部胆管癌的临床治疗提供了新思路。FBXW7在肝门部胆管癌标本以及其癌细胞株中表达均明显降低，并与肿瘤转移、TNM分期以及分化程度关系密切；体内外实验证实FBXW7沉默可促进肿瘤细胞上皮-间质转化、干细胞特性以及肿瘤细胞迁移，而过表达FBXW7则可以减弱上述过程。这为肝门部胆管癌术后早期复发的防治及预后判定提供新思路。