抗早期凋亡细胞IgG型抗体在狼疮性肾炎发病机制中的作用及其靶抗原研究

Increasing evidence demonstrated that apoptotic cells were the source of autoantigens of systemic lupus erythematosus，and interruption of the immune tolerance of early apoptotic cells might be early events in the development of SLE. In this study, we aimed to elucidate whether anti-early apoptotic cell antibodies from patients with lupus nephritis were involved in the pathogenesis of SLE and lupus nephritis through activating complement classical pathway on the surface of early apoptotic cells, disturbing the phagocytosis of early apoptotic cells, or preventing the release of anti-inflammatory cytokines after phagocytosis, and we also intended to find the target antigen of anti-early apoptotic autoantibodies through western-blot method.This study might be meaningful for predicting disease activity, judging prognosis, and discovering new therapeutic approach in lupus nephritis. In our preliminary experiment, we found that anti-early apoptotic autoantibodies from a patient with lupus nephritis could be involved in the pathogenesis of the disease at least by enhancing the release of the pro-inflammatory cytokine TNF-α, which indicated that further investigations of anti-early apoptotic antibodies in lupus nephritis might be deservable.

目前认为凋亡细胞是系统性红斑狼疮自身抗原的来源，早期凋亡细胞免疫耐受的打破可能是疾病发生中的早期事件。本课题拟利用Jurkat细胞凋亡模型及THP-1来源的巨噬细胞吞噬模型，运用亲和层析、流式细胞分析、ELISA等技术手段研究狼疮性肾炎患者抗早期凋亡细胞IgG型抗体是否可于早期凋亡细胞表面激活补体加速细胞膜破碎、影响巨噬细胞对早期凋亡细胞的吞噬及吞噬后炎症因子或抗炎因子的释放，以探讨其是否能够打破早期凋亡细胞的免疫耐受状态，参与自身免疫反应的诱发过程；同时拟运用western-blot方法初步明确其在早期凋亡细胞表面的靶抗原。研究结果有助于阐明疾病的发病过程、寻找临床生物学标志物及药物治疗靶点。我们前期预实验结果显示在部分狼疮性肾炎患者中该抗体至少可通过增加巨噬细胞吞噬早期凋亡细胞后炎性因子TNF-α释放，改变早期凋亡细胞清除的抗炎性参与致病，值得对其进行全面深入研究。

背景：母体抗SSA、抗SSB抗体经过胎盘进入胎儿体内，结合于凋亡细胞表面抑制凋亡细胞的清除，被认为是新生儿狼疮综合征的主要致病机制。非新生儿狼疮患者血浆中亦存在识别早期凋亡细胞的IgG，这部分抗早期凋亡细胞抗体是否具有致病性尚不明确。.方法：本研究利用紫外线诱导Jurkat细胞凋亡模型及THP-1来源的巨噬细胞吞噬模型研究狼疮性肾炎患者血浆IgG是否可于早期凋亡细胞表面激活补体、是否影响早期凋亡细胞的清除及吞噬后炎症因子的释放。.本研究纳入了具备完整临床及随访资料的39例活动性狼疮性肾炎患者，分析抗早期凋亡细胞抗体与临床指标及预后的相关性。.结果：纳入研究的8例抗早期凋亡细胞抗体中，其中P5患者IgG与正常人IgG（N IgG）相比，可明显促进早期凋亡细胞表面C3c及 C5b-9的沉积（50.67 ± 12.66% vs. 6.87 ± 4.01%，P<0.01，n=3；10.47 ± 0.71% vs.18.00 ± 1.14%，P<0.001，n=3）；明显促进早期凋亡细胞的清除（51.5 ± 4.66% vs. 34.80 ± 3.60%，P=0.002，n=5），并促进巨噬细胞吞噬早期凋亡细胞后炎症因子TNF-α及IL-1β的释放（442.8 ± 53.97 pg/ml vs. 1804 ± 648.9 pg/ml，P=0.009，n=5；281.3 ± 15.01 pg/ml vs. 358.0 ± 29.44 pg/ml，P=0.01，n=5）。.在临床资料分析中发现，抗早期凋亡细胞抗体阳性患者血清C3水平较低（0.34 ± 0.22 vs. 0.47 ± 0.17，P=0.059），抗dsDNA抗体水平明显较高（502.99 ± 275.48 vs. 214.13 ± 229.29，P=0.001）。在单因素logistic回归中，抗早期凋亡细胞抗体、抗早期凋亡细胞抗体及抗SSA抗体双阳性分别是影响狼疮性肾炎短期预后的危险因素（HR 7.50，95% CI: 1.210−46.504，P=0.03；HR 17.500，95% CI: 2.500−122.500，P=0.004）。.结论：部分狼疮性肾炎患者可能存在致病性抗早期凋亡细胞抗体；抗早期凋亡细胞抗体及其与抗SSA抗体联合检测可能成为狼疮性肾炎预后的生物学标志物。