CD40/CD40L轴在"痰毒互结"致动脉粥样硬化的作用及白藜芦醇干预机制研究

Atherosclerosis (AS) is belong to the phlegm and toxin syndrome in Traditional Chinese Medicine，which is close related with inflammation and oxidative stress. New data showed that immuno-inflammatory response mediated by CD40/CD40L signalling pathway is an importance pathological process of endothelial damage and AS. Resveratrol, as an important activators of SIRT1, can inhibit oxidative stress, inflammation and apoptosis. Our preliminary experiments showed Resveratrol significantly inhibited the expression of CD40 receptor of endothelial cells and inflammatory cytokines induced by CD40L in vitro, and reduced the area of AS plaque in AS. Based on these, we proposed that Resveratrol may play a role by activating SIRT1 to inhibit CD40/CD40L signalling pathway by inhibiting expression of CD40 receptor and other inflammatory mediators, reactive oxygen species and apoptosis in vitro and in vivo by CD40 gene knockout mice. We intend to investigate the effect of Resveratrol on resisting AS and explore its anti-inflammatory pharmacological mechanisms for its clinical application.

祖国医学认为"痰毒互结"是AS重要病因病机，与炎症及氧化应激密切关系。CD40/CD40L信号通路在内皮损伤和AS发生中发挥重要的作用。虎杖中重要活性组分- - -白藜芦醇,具有抗炎、抗氧化应激和抑制细胞凋亡作用。我们前期研究发现，白藜芦醇可抑制sCD40L诱导的内皮细胞CD40表达和炎症因子产生，缩小了兔动脉粥样斑块，但具体机制未明了。白藜芦醇是SIRT1重要激活剂，推测白藜芦醇可能激活SIRT1及下游信号通路与CD40/CD40L信号通路产生对话，从而产生抗炎效应。本课题首先在体外实验中，观察白藜芦醇对人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L及炎症介质、氧化应激及凋亡的影响；然后在CD40基因敲除小鼠和转染表达CD40载体前后，观察白藜芦醇干预对上述指标和动脉粥样斑块的影响，旨在探讨白藜芦醇新的抗炎症机制，为走向临床应用提供科学依据。

动脉粥样硬化进展导致的心血管疾病为全球人口首位死亡原因。白藜芦醇具有抗氧化、抗衰老、抗炎症等心血管保护作用而备受关注，但其保护内皮、抑制免疫炎症的机制尚未得到完全地阐述。CD40与其配体CD40L在动脉粥样硬化炎症反应中扮演着非常重要的角色。白藜芦醇对CD40/CD40L在动脉粥样硬化尚未得到研究。本研究旨在通过体外细胞及体内动物实验，研究白藜芦醇能否通过CD40/CD40L信号轴对血管内皮损伤和动脉粥样硬化发挥作用，探讨其中可能的分子机制。结果发现：第一，全基因组测序结果证实白藜芦醇可以通过调控多条信号通路，抑制TNF-α刺激血管内皮细胞炎症因子、趋化因子的产生及单核细胞的迁移活动，拮抗内皮细胞氧化应激反应。进一步研究发现白藜芦醇可通过影响Sirtuins家族的表达水平，促进SIRT1的表达，通过其与NF-κB相互作用，抑制NF-κB活性和p38 MAPK的磷酸化水平，从胞质与胞核两个亚细胞部位抑制CD40的转录与翻译，调控CD40-CD40L信号轴，从而抑制下游炎症因子释放和保护血管内皮细胞。第二，白藜芦醇可通过抑制CD40的表达水平，降低小鼠体重、胆固醇水平、有效抑制动脉内膜厚度的增加和斑块内胆固醇的沉积。证实了白藜芦醇具有调节体内血脂代谢，在体内通过调控 CD40信号分子的表达发挥抗动脉粥样硬化的作用，为白藜芦醇抗动脉粥样硬化的临床应用奠定了一定的基础。人组织激肽释放酶1和人金属蛋白酶组织抑制剂1的双基因共表达载体具有抑制血管平滑肌细胞增生的效应，对于动脉粥样硬化的血管重塑具有显著的改善作用。