SULT2B1-LXR信号通路在T细胞脂质代谢及动脉粥样硬化中的作用及其调控机制

Immuno-inflammatory response and lipid metabolism disorder are the important risk factors for atherosclerosis. Recent studies have shown that the activation of immune cells was associated with lipid metabolism and proliferation. But the role of sulfotransferase 2B1 (SULT2B1) was still unclear in T cell lipid metabolism and the progression of atherosclerosis. Our previous results found that T cell activation up-regulated the expression of SULT2B1, inhibited cholesterol efflux and increased the level of intracellular cholesterol ester. Based on these results, we hypothesized that T cell activation could inhibit reverse cholesterol transport, promote the lipid synthesis and increase immune inflammatory response through SULT2B1-LXR signaling pathways, thus promoting the development of atherosclerosis. Therefore, the project is designed to evaluate the expression of SULT2B1 and detect its interactive protein molecules after T cell activation, while RNA over-expression and knockdown technology will be used to explore the effect of SULT2B1 on immune response, cholesterol synthesis and transport and its possible signal transduction pathways in CD4+T cells . Then we establish the atherosclerosis model in mouse fed a high-cholesterol diet. After intravenously injecting SULT2B1 adenovirus in atherosclerosis model mouse, we explore the effects and mechanism of SULT2B1 on the progression of atherosclerosis, providing new strategies and targets for prevention and intervention manner for atherosclerosis.

免疫炎症反应和脂质代谢紊乱是AS形成的重要危险因素。国外研究显示免疫细胞SULT2B1与血脂代谢及细胞增殖相关。前期工作中，我们发现T细胞活化后可上调Lck 及SULT2B1表达、抑制胆固醇外流过程、增加细胞内胆固醇含量；而抑制Lck活性后，逆胆固醇转运增强。SULT2B1作为Lck的下游分子，可能成为直接介导免疫—血脂的“新桥梁”。据此提出假说：T细胞活化后通过SULT2B1-LXR信号通路，可抑制胆固醇转出，促进脂质合成，增加免疫炎症反应，从而促进AS的发生。因此，本研究拟：在细胞水平评估T细胞活化后SULT2B1表达及寻找与其相互作用的蛋白分子，同时运用RNA过表达及沉默等技术探索SULT2B1对CD4+T细胞免疫反应、胆固醇合成与转出的影响及信号转导通路；构建小鼠AS模型，静脉注射SULT2B1病毒进行干预，在体阐明SULT2B1介导AS进展的可能机制，为其防治提供新策略与新靶点。

冠心病是心血管疾病中引发死亡的主要疾病，目前主要的二级预防治疗方式是通过他汀类降低患者外周血LDL-C水平。然而，即使通过积极的他汀药物治疗，将LDL-C降至极低水平，主要心血管事件的发生率仅下降约30%，还存在大量残余风险。因此探讨AS过程中免疫系统与脂质代谢的相互作用机制，寻找与AS发生发展密切相关的分子干预靶点具有重大的科学和临床意义。SULT2B1是该家族唯一具有免疫源性、可调控增殖及影响脂质代谢的羟基类固醇硫酸基转移酶，因此我们构建了SULT2B1基因敲除病毒用来探索该基因是否与AS过程中的血脂代谢及炎症免疫反应相关。首先我们收集了经他汀治疗后LDL-C已降至极低水平（LDL-C<1.8mmol/L）的非冠心病及急性心肌梗死患者全血样本，发现急性心肌梗死患者淋巴细胞中SULT2B1、促炎因子、淋巴细胞内胆固醇酯含量均明显升高，接着选用Jurkat T细胞进行功能验证，将SULT2B1敲除慢病毒及LXRβ慢病毒进行共转染，结果提示SULT2B1可通过抑制LXRβ活性影响其下游逆胆固醇转运及炎症免疫反应，进一步研究发现由启动子低甲基化引起的SULT2B1上调可通过抑制低LDL-C水平的AMI患者淋巴细胞中的LXR-β促进胆固醇蓄积和炎症，以上结果说明目前单纯地降低外周血LDL-C水平无法有效降低细胞内胆固醇水平，而降低SULT2B1表达的治疗方法可能对降低细胞内胆固醇有益。此外，我们还在巨噬细胞上探索了SULT2B1对免疫细胞增殖及炎症反应的影响。通过构建SULT2B1敲除腺病毒转染Raw264.7细胞后发现下调SULT2B1可通过上调miR148a-3p进而抑制IKKβ/IκB/NFκB通路及炎症因子生成。该部分结果提示抑制SULT2B1可减弱ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞的增殖过程及炎症反应。因此，SULT2B1可作为一种防治动脉粥样硬化的新靶点。