LncRNA通过miRNA和ZEB2引发炎症性早产发生的机制研究

The function study of non-coding RNA on inflammation-induced apoptosis obtained breakthroughs. LncRNA-PACER was recently found to be a key element in inflammation induction. ZEB2 was reported to involve in the delivery initiation by microRNA-200. But there’re no reports on the correlation of lncRNA-PACER and ZEB2, no reports on how these elements involve in preterm delivery (PTD). LncRNA-PACER, miR-182 and ZEB2 are candidate factors differentially expressed in the preterm placenta, which were screened by microarrays by our team. A primary study showed there exist sequencing target relationship among LncRNA-PACER, miR-182 and ZEB2. We infer that LncRNA-PACER induces the apoptosis of cytotrophoblast by miR-182 and ZEB2 pathway. We will apply overexpression, silence expression and site-directed mutagenesis to disclose their relationship, their functions in cytotrophoblast apoptosis and their correlation to inflammatory PTD. It will help to disclose the mechanism of inflammatory PTD and to find new markers for the prediction.

非编码RNA在炎症反应介导的细胞凋亡中的作用取得了突破性成果，最新研究显示lncRNA-PACER 可能是受炎症诱导的一个关键因子,锌指蛋白E盒结合同源框基因2（ZEB2）受miR-200诱导参与分娩发动，而lncRNA-PACER 和ZEB2二者之间是否存在互作关系，及其参与炎症性早产的发生的机制尚无报道。LncRNA-PACER、miR-182、ZEB2是本研究团队早期通过芯片筛选到的在早产儿胎盘中差异表达的候选因子，初步实验结果提示三者间存在靶向顺次作用，由此推断“LncRNA-PACER通过miR-182和ZEB2介导的途径致滋养细胞凋亡，进而参与炎症性早产的发生”。本研究拟采用过表达、表达沉默和定点诱变等实验，探讨三者间的靶向调控关系及其在滋养细胞凋亡中的作用，探讨其与炎症性早产的相关性。这对于揭示炎症性早产的发生机制和发现新的早产标志物具有重要意义。

早产发生率约为8%，是新生儿发病和死亡的主要原因。近年有关LncRNA和miRNA在生物学功能中的作用取得了突破性成果，为早产发病的分子机制的研究提供了新线索。我们课题组通过芯片筛选到在炎症性早产样本中差异表达的LncRNA和miRNA，结合生物信息学分析和文献研读，确定lncRNA-PACER、miR-182-5p和miR-135b-5p等为候选研究对象，进一步预测miR-182-5p的靶基因为ZEB2。本研究通过在线数据库预测以及慢病毒表达载体转染、基因过表达和抑制表达、荧光原位杂交（FISH）、原位分子杂交、qRT-PCR、CCK-8、细胞划痕、Transwell、双荧光素酶报告基因系统、流式细胞术等实验方法，从细胞和分子水平，揭示LncRNA-PACER通过调控miRNAs影响滋养细胞生物学功能改变的分子机制。获得如下主要结果：.1.芯片筛选到一批有深入研究价值的基因及位点、lncRNA、miRNA。.2.FISH检测提示LncRNA-PACER主要定位在胞浆。.3.LncRNA-PACER过表达后细胞的迁移能力提升，沉默表达不影响细胞的迁移能力。lncRNA-PACER过表达后细胞侵袭能力提升，沉默表达后细胞侵袭能力下降。lncRNA-PACER不影响细胞的增殖能力。.4.LncRNA-PACER过表达后，miR-135b-5p表达下调，LncRNA-PACER沉默表达后，miR-135b-5p表达上调。miR-135b-5p过表达降低了细胞的迁移能力，凋亡细胞增加；miR-135b-5p低表达增加细胞的迁移能力，凋亡细胞减少；miR-135b-5p不影细胞的增殖能力。.5.双萤光素酶报告基因证实miR-182-5p的靶基因为ZEB2，过表达和低表达miR-182-5p后证实miR-182-5p可以与ZEB2基因发生相互作用。.6.miR-182-5p 低表达后，细胞的侵袭能力增强，过表达不影响细胞的侵袭能力。miR-182-5p 不影响细胞的增殖、凋亡和迁移。.综上所述，本文明确了 LncRNA-PACER主要定位在胞浆，miR-182-5p靶向调控ZEB2降低了细胞的迁移能力，LncRNA-PACER通过调节miR-135b-5p的表达影响细胞的迁移能力。实验结果有助于探究早产发生机制的新的研究方向，后续研究有望为早产的预警、诊断和防治提供新的线索。