首先用OVA对牛进行皮内和皮下分点注射,当血清效价达到1:12000时,再用硫酸盐常沉透法和DEAE层析法分离牛的IgG亚类。提取牛的肺巨噬细胞总RNA并分离mRNA, 反转录合成CDNA后,将处理过的CDNA与质粒PGDM8连接,构成牛肺巨噬细胞的CDNA表达文库,将该文库转染COS-7细胞,转染后5-20小时,用亚类(EgG1和IgGZ)致敏的磁颗粒(Dynabeads M-450)对转染的COS-7细胞进行筛选。然后根据电磁原理设计-磁性探针,装到显微镜上。用该磁性探针将阳性细胞有为附后,提取质粒,转化大肠杆菌,进行分子克隆。用该方法成功地在隆了年IgGFc受体I(boFcγRI)的全长CDNA,另外还克隆了牛CD14的全长CDNA。研究表明,该方法快速特异,是克隆细胞表面分子的实用技术。
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数据更新时间:2023-05-31
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