Toll样受体介导BHV-1感染宿主天然免疫反应的机制

Bovine herpesvirus virus 1（BHV-1）has the ability to infect a wide range of systems and tissues，is also an important cattle pathogen causing economic losses to the cattle industry. BHV-1 not only evades the immune system but also undergoes latent infection. Studies show that the facts mentioned above are obstacles of eradicating Bovine Rhinotracheitis. Toll like receptor (TLR) play essential role between innate and adaptive immune. How BHV-1 to affect the functional characteristics in innate immune post infection. Explaining the problem help to reveal innate immune response mechanisms of pathogenesis following infection with BHV-1. It being the fact that, in this study, in vivo and in vitro experiments were carried out By quantitative PCR, flow cytometry, and RNA interference technologies, and to detect the characteristics and signaling pathway of TLR2 and TLR9 in peripheral blood mononuclear cells (PBMC), embryonic bovine tracheal (EBTr) cells and monocyte-derived macrophage (MDM) following BHV-1 infection， and discuss The immune response to BHV-1 infection via toll like receptor-mediated mechanisms. Finally, this study provides a scientific basis for the further study of BHV-1 pathogenesis and exploring new vaccine adjuvants.

牛疱疹病毒I型(BHV-1)能引起牛多系统感染，主要引起呼吸道症状，是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。研究发现，BHV-1可以逃避免疫应答和建立潜伏感染并导致的持续感染是控制本病的主要障碍。Toll样受体(Toll like receptor，TLR)在天然免疫和获得性免疫之间起着桥梁的作用，BHV-1感染后对Toll样受体介导的天然免疫功能产生什么样的影响，对该问题的阐明无疑有助于揭示BHV-1 感染的致病机理。有鉴于此，本研究应用体内和体外实验，通过定量PCR、流式细胞术和RNA干扰等技术，测定BHV-1感染后外周血单个核细胞、牛胚气管细胞和单核巨噬细胞TLR2和TLR9的表达变化及其信号通路的功能，从细胞、分子和基因水平探讨 Toll样受体介导的BHV-1感染天然免疫反应的机制，旨在为深入研究BHV-1 的致病机理和探索新的疫苗佐剂提供科学依据。

BHV-1是牛传染性鼻气管炎（IBR）的病原，该病毒的免疫逃避和潜伏感染以及引起的持续性感染是控制IBR的主要障碍。TLR能够激活天然免疫并启动获得性免疫系统，其中TLR2和TLR9可介导宿主对疱疹病毒感染的天然免疫反应，本文应用定量PCR、流式细胞术和RNA 干扰等技术，从细胞、分子和基因水平探讨了 TLR2和TLR9介导的BHV-1 感染天然免疫反应的机制。. RT-PCR检测发现，EBTr细胞可以表达TLR1~10mRNA，从牛单核巨噬细胞未检出TLR3、TLR5和TLR9。定量PCR试验证明，BHV-1感染EBTr细胞的48h内，上调对TLR2mRNA的表达，下调对TLR9mRNA的表达。感染牛单核巨噬细胞后6 h和12 h后TLR2 mRNA相对表达量显著增高(P＜0.01)，24 h后感染组的mRNA表达量则显著降低(P＜0.01)，48 h感染组和对照组的表达量差异不显著。感染BHV-1 6 h后TLR9的mRNA表达量显著提高(P＜0.01)，12 h和48 h感染组表达量差异不显著。流式细胞术检测发现，BHV-1感染EBTr和牛单核巨噬细胞后TLR2和TLR9的表达增加。Western blot检测显示，BHV-1在感染EBTr细胞的48h内，上调对TLR2蛋白的表达，然而感染牛单核巨噬细胞 6 h和12 h后引TLR2蛋白表达水平上调，24 h TLR2蛋白表达水平被下调，48 h时感染组和对照组蛋白表达差异不显著。BHV-1感染MDBK和EBTr细胞不同时间点的细胞形态变化与病毒生长曲线一致。沉默TLR2和TLR9基因最佳siRNA片段为siRNA-TLR2C和siRNA-TLR9A，而且沉默TLR2和TLR9基因表达可抑制BHV-1的增殖。在EBTr细胞和牛单核巨噬细胞沉默TLR2和TLR9基因后炎性细胞因子IL-6、TNF-α和 IFN-β的表达下调，而小牛感染BHV-1后，炎性细胞因子IL-6、TNF-α表达下调，IFN-β的表达上调。. 本研究初步阐明了BHV-1与TLR2和TLR9的关系，为进一步研究TLR2和TLR9介导BHV-1感染的免疫机制奠定了基础。