糖痹康干预糖尿病周围神经病变氧化应激及其信号通路的研究

Diabetic peripheral neuropathy is one of the most common complications of diabetes and has a high incidence , now it been considered the main cause of Mutilation. Chinese medicine has rich experience in treat diabetic peripheral neuropathy, but how does it work is not clear. Oxidative stress in DPN is at the role mechanism of the DPN development process. Nrf2-nf-kappa B signaling the pathway plays an important anti-inflammatory antioxidants effect in the treatment of DPN. We have found that herbal compound Tang Bi Kang can improve nerve conduction velocity, suppress NF-κB expression in sciatic nerve, rise the level of SOD. So we predicte that Tangbikang protects the peripheral nerve function may through regulates NF-κB-Nrf2 signalling pathway to recover oxidative stress. Now we want to set up animal and cell experiments to sutdy how Tang Bi Kang regulate NF-κB-Nrf2 signalling pathway to against oxidative stress, and provide a basis for its clinical practice.

糖尿病周围神经病变(DPN)是糖尿病常见并发症之一，临床发病率较高，是糖尿病人致残的首要因素。中医药在DPN治疗方面积累了丰富的经验，特别是对于改善患者的临床症状有很好的疗效，其科学内涵亟待阐明。氧化应激在DPN发生发展过程中处于核心地位。抗炎抗氧化Nrf2-NF-κB信号途径对DPN的治疗具有重要影响。我们前期发现，临床有效方中药复方糖痹康（黄芪桂枝五物汤加味）具有抗炎并减轻氧化应激造成的周围神经损害，改善神经传导速度。本研究在现有研究基础之上，拟从炎症氧化应激及其信号通路角度，通过动物和细胞实验，观察糖痹康干预氧化应激以及多靶点调节Nrf2-NF-κB信号通路的作用机制，探讨中药复方治疗DPN的作用机理，为糖痹康治疗DPN提供理论及实验依据,为中药抗DPN研究提供新思路，为研发治疗DPN的创新中药奠定基础。

目的：观察中药复方糖痹康对糖尿病周围神经病变氧化应激及信号通路的影响，探讨中药复方治疗DPN 的作用机理，为研发治疗DPN 的创新中药奠定基础。.方法：（1）高脂饲料联合STZ 诱导DPN动物模型，糖痹康干预10~16周，α-硫辛酸作西药对照组，实验中记录大鼠一般状况，体重，血糖，给药结束后测定坐骨神经传导速度，取坐骨神经组织做病理切片，行HE，Weil’s染色观察坐骨神经形态变化，检测血清IL-6、TNF-α、GSH-px、SOD、MDA水平，检测坐骨神经组织中NF-κB、IκBα、Keap1、Nrf2蛋白和mRNA的表达。（2）培养大鼠雪旺细胞株RSC96，观察糖痹康含药血清干预高糖刺激雪旺细胞的生长增殖情况，荧光标记DCFH. DA用流式细胞仪检测活性氧含量，FITC-Annexin V/PI 检测法细胞凋亡。免疫荧光法检测NF-kb 和Nrf2 蛋白定位。WB和qPCR检测NADPH 氧化酶phoxP22 亚基、iNOS、Bcl-2、caspase-3蛋白与基因表达。采用siRNA转染方法，培养Nrf2（+/+）和Nrf2（-/-）表达雪旺细胞，加入NF-kb抑制剂和Nrf2激动剂，检测Iκk-NF-κB 及Keap1-Nrf2 信号通路相关蛋白的活化水平和基因表达。.结果：动物实验表明，中药复方糖痹康能降低有效DPN大鼠血糖，抑制体重减轻，提高坐骨神经传导速度，减轻神经组织病理学损害，上调SOD水平及Nrf2表达，降低IL-6、TNF-α、MDA水平及NF-κB p65、IκBα、Keap1表达。细胞实验结果显示，糖痹康能够抑制高糖诱导雪旺细胞NF-kB信号通路激活，下调p22、iNOS、capase-3表达，促进Nrf2转导，减轻氧化应激与凋亡。.结论：中药复方糖痹康能有效治疗糖尿病周围神经病变，保护和修复坐骨神经损伤，减轻机体和组织细胞的炎性损伤，可能与激活抗氧化核心因子Nrf2负性调控NF-κB信号通路有关。