鳕鱼皮中流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的研究

流感是严重危害人类健康的急性呼吸道传染病。目前，仅有少数的治疗药物在国外正式上市，这些药物不仅价格较高,生产时间长,而且还有严重副反应。因此,寻找高效、天然的抗流感药物就显尤为重要和急迫。本项目以低值鳕鱼皮为原料，流感病毒神经氨酸酶抑制活性为初筛指标，通过控制酶切位点，制备出具有神经氨酸酶抑制活性的蛋白水解产物；利用超滤、液相色谱等分离技术，纯化出其中高活性的抑制肽，应用串联质谱鉴定其序列结构；对所纯化的活性肽进行设计合成，利用核磁共振及X射线单晶衍射，确定肽与神经氨酸酶的结合位点，采用MDCK细胞培养及人流感病毒侵染技术对抑制肽进行抗病毒活性检测。初步揭示神经氨酸酶抑制肽的结构特征与抗流感病毒活性的关系，探讨其抗病毒机制。本项目的研究为开发天然多肽类新型抗流感病毒药物提供理论和技术基础，具有重要的理论价值和现实意义。

本项目以低值鳕鱼皮为原料，流感病毒神经氨酸酶抑制活性为初筛指标，通过控制酶切位点，制备出了具有神经氨酸酶抑制活性的蛋白水解产物；利用超滤、液相色谱等分离技术，纯化出了其中高活性的抑制肽，应用串联质谱鉴定了其序列结构；采用MDCK细胞培养及人流感病毒侵染技术对抑制肽进行了抗病毒活性检测。初步揭示了神经氨酸酶抑制肽的结构特征与抗流感病毒活性的关系，探讨了其抗病毒机制。根据鳕鱼皮肽的结构表征，发现抗流感病毒活性与肽中极性氨基酸的含量相关。因此，课题组对不同的水产原料进行了筛选，结果表明极性氨基酸含量最高的中国毛虾活性肽抗病毒能力最强。纯化出的毛虾肽抗流感病毒活性优于鳕鱼皮肽和对照组利巴韦林，且不被胃肠道蛋白酶降解，易被人体直接吸收。利用计算机辅助药物设计软件（SYBYL）确定了毛虾肽与神经氨酸酶结合的位点；通过作用方式及血凝实验，表明毛虾肽的抗病毒作用具有多靶点。本项目的研究为开发天然多肽类新型抗流感病毒药物提供理论和技术基础，具有重要的理论价值和现实意义。