土茯苓治疗高尿酸血症的机制研究

高尿酸血症是一种常见病，其病因病机，中医认为主要是先天禀赋不足或饮食不节、七情内伤、劳倦过度等导致脾失健运、水谷不化、湿浊痰瘀滞于血脉。土茯苓因具有利尿、抗炎、除湿等功效而被列入到诸多治疗方剂中。当前，中医药研究已经从模糊的整体观逐渐走向精确的整体观，因此本研究基于高尿酸血症动物模型进行土茯苓的干预治疗，利用iTraq蛋白质组及生物信息学技术获取模型组和治疗组之间与尿酸转运或代谢相关的差异蛋白，用含/不含14C标记的尿酸体外培养肾小管上皮细胞、RNAi技术对候选蛋白的功能进行验证，阐明土茯苓降低尿酸的作用机制。最后利用快速液相色谱技术分离出土茯苓的各种组分，观察它们对筛选出蛋白的调节作用，获取土茯苓中有效降低尿酸的关键组分。从分子生物、细胞生物和动物学层面对土茯苓降低尿酸的作用机制及相应的有效成分进行阐明。

建立了高尿酸血症大鼠模型，并进行土茯苓的干预治疗。留取的肾脏组织标本进行了最新的非标定量蛋白质组学检测。获取了一批治疗组和模型差异蛋白。该技术在一定程度上减少了经费的开支，相比于iTraq技术，缩减了实验费用。根据在线生物学信息的分析，针对性地利用western blot成功验证了几个差异蛋白，发现Catalase、OAT、galectin-1等在土茯苓治疗后出现了改变，而这些蛋白可能与尿酸在体内的代谢、转运或相关作用通路有关。此外还对这些差异蛋白进行了pathway分析，结果表明Regulation of actin cytoskeleton，Focal adhesion，Fructose and mannose metabolism等占了主导地位。负责清除H2O2的catalase在两组中有较大的差异表达，而前期实验表明高尿酸可以引起内皮细胞H2O2的过度生成，着重在体外验证了catalase在土茯苓保护血管内皮中的作用及功能机制。研究表明土茯苓能增加catalase的表达及活性，从而清除高尿酸导致内皮细胞过度生成的ROS（主要成分是H2O2）。随后，利用RNAi进一步验证了这一功能。其它相关的研究成果包括：（1）高尿酸首先激活AR途径，进而提高NADPH氧化酶来源ROS的产生，促进炎症反应的发生。（2）阐明高尿酸抑制血管新生部分是通过miR-92a调控KLF2-VEGFA来实现的，将是今后防治CVD和CKD的一个新靶点；（3）利用已有的海曼肾炎大鼠模型的组织样品，基于新建立的非标定量蛋白质组学检测技术进行了相关研究，发现自噬是导致足细胞内质网应激的重要环节，在此过程中，VCP蛋白占有重要的作用地位。