双氢青蒿素的靶标鉴定、确证及抑制SLE-CD4+T细胞的机制研究

The identification and verification of drug targets are of great significance for understanding the mechanism of action and drug application. Dihydroartemisinin (DHA) have been successful used to treat malaria, and also many other dieases, which suggests that DHA has lots of targets and complex mechanism. Besides this, a variety of evidences suggest that DHA may also holds great potential for the treatment of Systemic Lupus Erythematosus (SLE), maybe due to inhibiting SLE-Th cell acitivity. However, DHA targets are still unclear. The identification and verification of DHA targets will help to understand the application of DHA anti-diseases incuding SLE. Before, we have established the global discovery and functional research process of small molecule target protein based on protein chip. Bear this in mind, taking advantage of our protein microarray and bioinformational analysis platform, we will seek out a group of targets of DHA. Then, using biochemical, molecular and MS technology, we verify the combination and find the binding site between DHA and those proteins. Last, we will focus on functional study with SLE-CD4+T cell. We believe this study will strengthen our understanding on the anti-SLE mechanism of DHA, thus pave the way for a wider and more effective application of DHA in the treatment of SLE.

药物靶标的发现及确证对于理解药物的作用机理及药物应用具有重要意义。双氢青蒿素（DHA），除了有效治疗疟疾外，也适用于包括多种疾病，表明DHA体内作用机制复杂，存在多靶标模式。同时DHA在系统性红斑狼疮（SLE）治疗上也展现了较大的潜力，可能是通过抑制Th细胞活性等方面起作用，但具体作用靶标及机制并不清楚。因此DHA的靶标发现及作用机制的研究将有利于理解它在多种疾病尤其针对SLE的有效应用。前期已建立了基于蛋白质芯片标准化的小分子靶蛋白全局性发现及功能研究流程。基于此方法，本课题将采用蛋白质芯片和生信分析技术进行DHA靶标的发现及建立作用网络以获得可能靶标及调控途径，采用生化、分子、质谱等技术确证DHA和靶标结合及结合位点，采用细胞实验确认DHA如何通过靶标抑制SLE-CD4+T细胞的。此研究成果将帮助我们从分子层面上理解DHA的作用机理及对SLE有效的可能机制，以期为SLE治疗提供指引。

药物靶标的发现及确证对于理解药物的作用机理及药物应用具有重要意义。双氢青蒿素（DHA），除了有效治疗疟疾外，也适用于包括多种疾病，表明DHA体内作用机制复杂，存在多靶标模式。同时DHA在系统性红斑狼疮（SLE）治疗上也展现了较大的潜力，但具体作用靶标及机制并不清楚。通过前期已建立的基于蛋白质芯片标准化的小分子靶蛋白全局性发现及功能研究流程，项目负责人系统性发现了DHA的直接相互作用蛋白。采用Panther和STRING软件分析，新发现的蛋白分类广泛、作用多种调控网络，主要聚集于代谢相关调控、免疫调控。其中一大类为热休克蛋白，包括HSP90相关的CDC37，HSP70相关的HSP70A1A、HSP70A2、HSP70A6、HSPBP1，一类为泛素化相关蛋白UBE家族蛋白，这些蛋白可能是DHA有效作用SLE的关键靶蛋白。进一步的体外生化实验证明了DHA和这些蛋白直接相互作用。结合结构生物学分子对接模拟蛋白和DHA的结合情况，并推测出潜在的结合位点。体外构建突变的结合位点的变体，体外实验发现与DHA结合明显减弱，确定了与DHA结合关键位点。此研究成果将帮助我们从分子层面上理解DHA的作用机理及对SLE有效的可能机制，以期为SLE治疗提供指引。