藏药无尾果基于NF-κB通路抗类风湿性关节炎物质基础及作用机制研究

Rheumatoid arthritis is a clinically chronic common disease with high incidence and high disability, and there are no effective methods or drugs on its treatment at present. Tibet medicine “Regunba”, with complex resources, was usually used to treat arthritis. As surveyed, Coluria longifolia Maxim. was one of the main commodity on the market, but researches about it were rarely reported. Our preliminary investigations proved that the ethnol extract of C. longifolia exhibited good protective effect against Collagen-induced experimental RA model rats by relieving paw swelling, decreasing arthritis index and suppressing p65 and IκBα phosphorylation. Chemical examination resulted in the isolation of 2 rarely reported triterpenoids. In order to clarify the material basis and mechanisms of C. longifolia for anti-RA, the chemical constituents will be studied by bioassay-guided isolation combined with various chromatographic and spectroscopic methods. Based on serum pharmacochemistry method, all the constituents absorbed into blood will be screened for anti-inflammatory activities, investigating the expression change of relevant inflammatory cytokines and proteins in the models of cellular and molecular. Further mechanisms of the bioactive compounds will be studied based on the NF-κB signaling pathway. This project will provide scientific basis for clinical application, development and utilization of C. longifolia, and offer material basis for the development of new anti-RA drug.

类风湿性关节炎（RA）为临床常见慢性疾病，发病率和致残率高，现有药物疗效不理想。“热衮巴”为藏医治疗关节炎常用药材，基原复杂，据调查，蔷薇科药材无尾果为其市场主要流通品种之一，资源丰富，却未见相关研究报道。前期研究表明无尾果乙醇提取物能显著降低II型胶原诱导关节炎（CIA）大鼠足肿胀度和关节炎指数，具有良好的抗RA作用，且可显著抑制NF-κB通路关键蛋白p65和IκBα磷酸化表达，并从中获得了2个结构新颖的三萜。本项目拟在此基础上开展以CIA整体动物活性追踪为导向，联合采用多种色谱和光谱学技术进行有效部位化学成分的分离和鉴定、基于血清药物化学检测入血成分在细胞和分子水平对相关炎症因子及蛋白表达水平的变化、活性成分对NF-κB信号通路中关键蛋白表达的影响等研究，阐明无尾果抗RA的活性成分及作用机制。本项目的实施可为无尾果临床合理用药及开发利用提供科学依据，也可为抗RA新药的研发奠定物质基础。

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）为临床上常见慢性疾病，发病率和致残率高，现有药物疗效不理想，因此，新型高效抗RA药物的研发非常重要。蔷薇科药材无尾果为藏医治疗关节炎的常用药材，但其药效物质基础尚不清楚。为了该藏药的开发利用，通过II型胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠模型，我们考察了该药材乙醇提取物对CIA大鼠体质量、关节炎指数、足肿胀程度、关节病理改变及 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-2、p65、IκBα 磷酸化水平的影响，研究发现无尾果乙醇提取物具有良好的抗RA作用，其机制可能与 NF-κB 信号通路有关。建立TNF-α诱导 MH7A类风湿关节炎滑膜细胞模型对无尾果总提物、水部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和石油醚部位活性进行研究筛选其活性部位，采用 CCK8 法检测各部位对MH7A 细胞的增殖活性；流式细胞术检测 MH7A 细胞凋亡；ELISA 法检测IL- 6、IL- 4、IL- 1β、血管内皮生长因子（VEGF）、NF-κB 受体活化因子配体（RANKL）水平；Western Blot 法检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase-9、Caspase-3 和Bcl- 2表达水平；研究表明水部位和正丁醇部位为其主要药效部位。此外，我们还通过动物实验对其抗RA活性部位的筛选进行了研究，该研究进一步表明正丁醇部位为其主要药效部位，其作用机制与抗氧化和Nrf2通路有关。对正丁醇部位进行化学成分的研究，得到并鉴定了黄酮、苯丙素和其他类成分27个，包括1个新天然产物。此外，我们还考察了部分化合物对TNF-α诱导MH7A细胞增值活性的影响，研究发现(-)-olivil diacetate和(-)-olivil monoacetate具有抗RA活性。通过以上研究初步明确了无尾果抗RA活性、作用机制及活性成分的类型。本课题的实施，可为无尾果临床和开发利用提供科学依据，也可为抗RA药物的研发提供物质基础。. 此外，我们还对“热衮巴”另一原药材雪白委陵菜的抗RA活性及化学成分进行了初步研究，研究表明，雪白委陵菜具有良好的抗 RA 作用，其作用机制可能与诱导细胞凋亡及Sirt介导的AMPK信号通路有关。并首次从其乙醇提取物中分离鉴定了三萜、黄酮类化合物12个。