钠泵α亚单位截断性片段-PLGA注射微球的临床前研究

高血压病危害严重，降低血压是高血压治疗之根本，本项目结合降压药研发趋势，基于已完成的国家自然科学基金项目（No:30500204）成果，证实钠泵α2,α3-亚单位膜外区截断性片段具有降压作用，有望开发为具有完全自主知识产权的新型降压药（已获国家发明专利，ZL:200610042741.1）。但其药效短、药理参数不明，亟待深入研究，本项目由此立题。采用可生物降解微球技术制备钠泵α2,α3-亚单位膜外区截断性片段PLGA注射微球延长药效，采用PK/PD模型、LC-MS/MS、膜片钳等技术研究该微球药理学特征和参数，为Ⅰ期临床试验奠定基础。其创新性在于：采用钠泵α2,α3-亚单位膜外区截断性片段作为假受体（decoy receptors），通过制备PLGA注射微球延长药效，拮抗多种钠泵抑制因子对钠泵的抑制、降低血压。本项目的实施将为高血压的治疗提供一种新型降压药，具有重大科学意义及巨大经济效益。

钠泵抑制因子对钠泵活性的抑制所导致的钠泵转运障碍被公认是高血压（尤其是盐敏感性高血压）的发病机制之一，高血压发病的钠泵抑制假说已被广泛接受。该项目主要完成并取得一下成绩：（1）完成钠泵结构的生物信息学分析，确定了钠泵膜外区氨基酸序列，人工合成、纯化以及定性分析了截断性片段多肽, 证实人工合成的大鼠钠泵膜外区截断性片段能够一过性降低高血压大鼠（盐敏感高血压大鼠和哇巴因高血压大鼠）的血压，在此基础上，目前正在进行钠泵2,3-亚单位膜外区截断性片段PLGA注射微球的制备，以期延长药效其对盐敏感性高血压大鼠和哇巴因高血压大鼠的降压作用时间；（2）分别制备了抗大鼠钠泵alpha1、alpha2、alpha3亚单位膜外区H1-H2 肽段特异性抗体，为确定钠泵的组织学分布提供了条件。（3）证实哇巴因在导致大鼠血压升高的同时还能延长SD大鼠心室肌细胞动作电位时程，导致心肌结构重构及电重构；（4）还发现细胞膜表面钠泵α亚单位mRNA及蛋白表达水平的失衡，可能是HUVEC复制性衰老的分子机制之一；D-半乳糖诱导可构建HUVEC亚急性衰老模型。（5）制备了抗哇巴因IgY抗体，并采用IgY抗体确定了哇巴因在肾上腺组织中的组织学定位。（6）还发现钠泵（Na+,K+-ATPase）与钙离子激活的氯离子通道(CLCA)具有密切关系，且均在高血压发病中发挥重要作用.我们通过对anoctamin蛋白结构和膜外区的分析，分别确定了6个B细胞抗原表位，并采用体外肽合成技术直接获得人anoctamin蛋白膜外区B细胞抗原表位肽段，并制备了特异性抗体。目前正在进行钠泵与钙离子激活的氯离子通道相互作用及其在高血压中的作用的研究。（7）该项目的实施，已培养硕士研究生1名、发表论文2篇，参编专著1部。