血吸虫亮氨酸氨基肽酶和果糖二磷酸醛缩酶诱导负向免疫调控机制的研究

蠕虫感染诱导的宿主Th2免疫偏移已成为感染免疫调节研究的重要模型。血吸虫感染早期，宿主呈现Th1优势应答，随后出现Th2免疫偏移，其负向免疫调控的机制至今尚未明了。本课题组已筛选、克隆表达出了虫源性糖蛋白亮氨酸氨基肽酶（SjLAP）和果糖二磷酸醛缩酶（SjFBPA），发现能够显著诱导宿主Th2免疫极化，推测可模拟偏移应答模型。本课题拟利用感染小鼠和CIA模型鼠，在体内外系统研究SjLAP 和SjFBPA对Th1/Th2、Treg/Th17、M1/M2平衡的负向调控，观察其对CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）、旁路途径激活的巨噬细胞（M2）、Tim-3-Galectin-9通路介导的Th1凋亡和抑制的影响；采用MACS分离，FCM和芯片检测，结合microRNA表达，以揭示虫体免疫逃避、宿主免疫耐受、免疫偏移、免疫病理以及疫苗"失能"的分子机制。此类研究，国内外未见报道。

血吸虫感染可以显著抑制Th1型应答的自身免疫性疾病。本研究旨在探索虫源性分子用于预治自身免疫性疾病的效果。前期实验发现，与半胱氨酸酶抑制剂（Sjcystatin）相比，reSjFBPA上调Th2应答作用不明显。故此把重点转向日本血吸虫Sjcystatin的免疫调节研究。主要疾病模型为小鼠结肠炎结和胶原性关节炎。.rSjcystatin腹腔注射TNBS诱导的结肠炎小鼠，对结肠病变进行炎症评分。结果发现治疗组小鼠疾病活动指数、结肠病变评分及病理分级评分均明显低于非治疗组；治疗组小鼠脾淋巴细胞CD4+IFN+例明显降低（p<0.05）； MLN中 CD4+IFN+ 比例明显降低(P<0.05)，MLN中 Treg比例和TGF-β mRNA明显高于对照组（P<0.05）；治疗组LPMC的CD4+IFN+比例明显减少（P<0.05），而该组CD4+CD25-Foxp3+比例均明显高于对照组（P<0.05）。rSjcystatin治疗可降低结肠黏膜组织IFNγ表达； 明显上调IL-4、IL-13、IL-10、TGF-β水平，降低结肠组织T-bet表达，而提升GATA-4、Foxp3表达。因此，rSjcystatin能显著减轻小鼠结肠炎的病理损伤，降低局部炎症因子的表达，其机制是通过恢复Tregs细胞功能，下调病理过程中的Th1优势应答。.关节炎研究中，rSjcystatin预先注射小鼠，以牛II型胶原免疫小鼠建立小鼠胶原性关节炎（CIA）模型。结果发现，小鼠关节炎明显减轻，病理评分降低。脾淋巴细胞CD4+IFN+、CD4+IL-17A+明显下降，而Tregs轻度上升；脾细胞上清的IL-4、IL-10水平上升，促炎因子水平下降；血清CII特异性 IgG2a下降，IgG1上升；关节部位RANKL mRNA、 TNF-α、IL-17、IL-6以及T-bet、RORγt mRNA 表达减少，而IL-10、Foxp3 mRNA 表达增加。预防性给予rSjcystatin能够降低促炎症因子的释放，诱导Th2偏移从而减轻关节炎症及局部病理改变。 .结果表明， rSjcystatin可显著预防和治疗IBD和CIA，其机制是上调机体Th2/Tregs的应答，恢复患病机体的免疫平衡。rSjcystatin为重组多肽，无毒副作用，产品易得，其对自身免疫性疾病的抑制性缓解作用值得深入研究。