基于组织缺氧与肝窦内皮细胞损伤探讨当归补血汤抗肝窦毛细血管化的作用机制及益气治法特点

肝窦毛细血管化既是肝脏血管新生的重要形式，又是肝纤维化难以逆转的病理基础，在既往重用黄芪益气的当归补血汤抗肝纤维化取效的工作基础上，围绕"缺氧- - 肝窦内皮损伤- - 肝窦毛细血管化"这一肝纤维化关键环节，通过析因设计，以血管新生抑制剂索拉非尼为对照，观察黄芪:当归5:1组成的当归补血汤影响肝组织缺氧及肝窦内皮损伤的抗肝窦毛细血管化作用机制及益气治法的作用特点；继而围绕"HIF-1α/VEGF/MAPK"信号通路，探讨当归补血汤及黄芪抗缺氧诱导肝窦内皮损伤的细胞分子药理机制；围绕肝窦内皮损伤，应用细胞高内涵分析方法发现该方抗肝窦毛细血管化主要效应成分。以期阐明当归补血汤抗肝窦毛细血管化作用机制及主要物质基础，发现益气治法的作用特点，丰富肝纤维化气虚血瘀的科学内涵，促进中医益气活血法抗肝血管新生在慢性肝病治疗上的应用发展。

从组织缺氧与肝窦内皮细胞损伤角度，引入同步辐射X线二维成像技术评价肝脏微血管，通过整体动物实验，探讨当归补血汤抗肝窦毛细血管化的作用机制及治法特点；通过肝细胞损伤和内皮细胞损伤2个细胞模型，采用细胞活力、细胞毒性、NO、NOS、CD31等7个指标，初步筛选出当归补血汤抗肝窦毛细血管化的部分效应物质成分；并采用原代肝窦内皮细胞缺氧损伤模型和斑马鱼血管新生模型对活性成分进行验证，选择其中效果显著者进行体内动物实验验证。结果发现，当归补血汤抗肝纤维化作用与抗肝窦毛细血管化密切相关；全方及拆方有显著抗肝窦毛细血管化作用，益气和活血两种治法协同配伍，通过调控“HIF-1α/VEGF/MAPK”信号通路，改善肝纤维化时缺氧引起的肝窦内皮损伤所致的肝窦毛细血管化。并发现当归补血汤抗肝窦毛细血管化的主要效应成分中，欧当归内酯A同时具有保护肝细胞损伤作用，并经动物实验验证其在体内也具有抗肝窦毛细血管化和抗肝纤维化作用，为新药发现奠定了实验基础。项目基本按计划完成，并略有调整。增加同步辐射X线成像技术，对肝脏微血管系统进行二维成像，以评价中医药抗血管新生的作用；增加肝细胞过氧化氢损伤模型用于活性成分筛选，期望筛选出的活性成分对肝细胞损伤无加重或有保护作用；增加欧当归内酯A的体内抗纤维化及抗肝窦毛细血管化活性验证。