RNA结合蛋白CUGBP1影响大肠癌侵袭转移的分子机制研究

为了深入理解大肠癌复发转移发生的分子基础，申请者课题组根据术后随访情况，收集侵袭性与非侵袭性大肠癌的新鲜组织标本抽提RNA，进行基因表达谱差异的分析，结合real-time PCR验证，确认了一系列与大肠癌转移相关的特异性功能分子。由此关注到一个尚未在肿瘤中存在报道的基因- - CUGBP1（CUG-binding protein 1）可能参与调控大肠癌细胞的侵袭转移过程。在此基础上，本项目拟通过构建过表达、RNAi和功能回复的慢病毒载体，上调和下调大肠癌细胞中CUGBP1的表达，检测CUGBP1表达下调后大肠癌细胞侵袭转移能力的变化，并在肝转移动物模型上进行成瘤能力的验证。进一步，通过基因谱和蛋白谱分析，RIP-chip技术鉴定RNA结合序列等方法，探讨相关分子机制。此课题的实施不仅有助于阐明大肠癌侵袭转移的分子基础，同时对提供有临床价值的分子靶标无疑也是一种有益的探索。

项目背景：.结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，在西方国家，结直肠癌是发病率第二位的恶性肿瘤，在中国，其发病率与死亡率也呈逐年上升的趋势，在恶性肿瘤中排第四位，严重威胁人类的健康与生命。肿瘤的侵袭转移涉及一个复杂的、多因素的分子调控网络。针对结直肠癌转移相关的关键调节因子进行深入研究，挖掘转移复发的分子标记或靶向治疗分子，具有重要的临床价值，也拥有广阔的应用前景。.研究方向：.为了深入理解结直肠癌复发转移发生的分子基础，申请者前期关注到一个尚未在肿瘤中存在报道的基因——CUGBP1（CUG-binding protein 1）可能参与调控结直肠癌细胞的侵袭转移过程。此课题的实施不仅有助于阐明结直肠癌侵袭转移的分子基础，同时对提供有临床价值的分子靶标无疑也是一种有益的探索。.主要内容：.（1）利用在SW480细胞中过表达CUGBP1基因，而在DLD-1细胞中通过RNAi抑制CUGBP1的表达，观察肿瘤细胞形态变化和侵袭转移功能变化。.（2）在结直肠癌肝转移模型中，验证CUGBP1表达对结直肠癌细胞侵袭转移能力的影响。.（3）从基因表达谱和蛋白表达差异寻找CUGBP1沉默之后显著改变的信号通路与下游分子。.实验结果：.1.CUGBP-1是肠癌患者预后的独立风险因子。.2. CUGBP-1在肠癌转移灶中表达较原发灶增高。.3. CUGBP-1在不同肠癌细胞系中表达均升高.4.在SW480与DLD-1细胞株中降低CUGBP-1表达，肿瘤增殖侵袭能力下降。.5. CUGBP-1可能通过ErbB通路介导肿瘤转移过程，下调CUGBP-1表达导致HER2、MAPK/ERK 和PI3K/AKT信号通路的关键分子的表达下降。.科学意义：.（1）证实CUGBP1在结直肠癌体内、体外侵袭转移中扮演的重要角色；.（2）初步探索其发挥作用的下游信号通路分子机制。.（3）为肠癌肝转移的早期诊治提供科研基础。