乙型肝炎病毒表面抗原糖基化变异与肝细胞恶性转化的关系及调控机制研究

Hepatitis B virus is a major risk factor for the development of hepatocellular malignant transformation. HBV mutations are closely related to hepatocellular malignant transformation, but current research on the association between HBs surface antigen mutations and HCC was limited. It was reported that HBV immune escape was an independent significant risk factor for hepatocellular malignant transformation. The important role of N-glycosylation mutations within hepatitis B virus surface in immune escape and its impacts on HBV biological characteristics had been identified in our previous research as also as its relationship with hepatocellular . In this project, we will further study the relationship between HBsAg N-glycosylation mutations and HCC，as well as pathogenic mechanisms of HBV related HCC, on the basis of previous study and established HBV phenotype plat form. The prevalence and pathogenesis of N-glycosylation in HCC will be studied from molecular epidemiological survey, host cell gene expression profile, the change of microRNA expression profiles, Endoplasmic reticulum stress and the activation of autophagy，hepatocellularl tumorigenicity. Our results will deepen the understanding of the pathogenesis of hepatocellularl malignant transformation, providing the early diagnosis and prevention on it.

在我国乙型肝炎病毒感染是引起肝细胞发生恶性转化的最主要因素，HBV突变与肝细胞恶性转化的关系密切，但目前缺少表面抗原变异与此方面关系的研究。目前有报道认为慢性乙肝病毒感染时发生病毒的免疫逃逸是发生肝细胞恶性转化的独立危险因素，我们在前期研究工作中发现表面抗原的N-糖基化突变是我国乙肝病毒免疫逃逸突变的主要原因，并且已证实这种突变可明显改变病毒的生物学特性，同时也发现糖基化突变可引起肝细胞的凋亡和内质网应激的改变。本申请课题将在原有工作的基础上，利用已建立的HBV表型研究平台，从分子流行病学调查，宿主细胞基因表达谱和MiRNA表达谱的改变，细胞内质网应激的发生和自噬的激活，细胞致瘤性等角度研究表面抗原N-糖基化突变与肝细胞恶性转化关系及其作用机制，将有助于深化肝细胞恶性转化的发病机制认识，对其早期诊断和预防起到推进作用。

在项目开展期间，按任务书计划开展实验研究，在成功构建了重组HBsAg的腺病毒和慢病毒及相应的稳定细胞株的基础上，利用转录组测序技术研究HBsAg N-糖基化突变对细胞蛋白表达的影响；进一步研究了HBsAg N-糖基化变异与细胞凋亡、内质网应激和自噬发生的关系，发现了HBsAg的N-糖基化突变可能通过引起内质网应激而诱发细胞的凋亡，为进一步揭示肝细胞恶性转化与HBV感染的关系，我们研究了慢性乙型肝炎病毒感染者肝纤维化相关基因表达谱。通过收集了124例慢乙肝患者的肝活检组织样本，用Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0基因表达谱芯片检测，筛选出糖基化蛋白 Integrin beta-like 1( ITGBL1) 可以通过上调TGFβ1的水平在乙型肝炎相关纤维化的发生起到重要作用，进一步通过检测分析肝癌及癌旁组织、肝癌细胞株及肝正常细胞株中ITGBL1的表达，发现ITGBL1 ITGBL1基因可通过TGF-β/Smad信号通路调控EMT过程及下游KRT17分子表达，从而促进肝癌细胞的迁移和侵袭。同时我们也观察了HBsAg 野生型和N-糖基化突变株对cccDNA的转录等活性是否有影响，并通过进行了反式互补试验进一步验证，首次发现HBsAg 野生型和N-糖基化突变株对于cccDNA的转录等活性有不同的影响。 我们的研究结果将有助于深化肝细胞恶性转化的发病机制认识，对其早期诊断和预防起到推进作用。