β-羟丁酸在奶牛皱胃弛缓和运动神经机能紊乱中的作用研究

皱胃变位（DA）是围产期奶牛常见的疾病，特征是皱胃运动神经功能紊乱所引起的皱胃弛缓、扩张和移位，但运动神经功能紊乱的原因和机理尚不很清楚。本项目以β-羟丁酸（β-HB）是神经活动的信号分子，能够影响皱胃平滑肌张力和神经机能为理论假设，以临床DA奶牛为模型，利用原位杂交、荧光定量RT-PCR、Western-blot等技术，检测DA奶牛皱胃平滑肌、肌间神经元中β-HB受体及PLC、IP3和Erk1/2等信号分子的变化规律。同时观测β-HB对体外培养皱胃平滑肌细胞、肌间神经元的细胞形态、神经递质（SP、VIP和GFAP等）和相关信号分子，以及对健康奶山羊瘤胃和皱胃肌电频率、神经递质及相关信号分子的影响。探讨β-HB对皱胃平滑肌和肌间神经元机能的影响，以期揭示β-HB在奶牛DA发生中的作用及机制，为防治DA提供新的思路。

本项目主要研究了不同浓度β-HB（0、0.6mmol/L、1.2mmol/L、2.4mmol/L、4.8mmol/L）对体培养的皱胃平滑肌细胞（BSMC）细胞功能蛋白p38、JNK、 ERK、 p53等方面的影响以及对建立的β-HB注射诱导小鼠胃平滑肌细胞凋亡模型；结果表明β-HB对体外培养的皱胃平滑肌细胞存在较大影响：1）β-HB促进BSMC的p38、JNK、ERK、p53的磷酸化水平；2)β-HB促进BSMC的凋亡蛋白Bax、Bcl-2 、caspase-12、caspase-9、caspase-3、AIF、Endo G的表达的MLC的mRNA水平和磷酸化水平；3）在建立的β-HB注射诱导小鼠胃平滑肌细胞凋亡模型中也观察到β-HB促进了这些凋亡蛋白的表达。.本项目同时也研究了不同浓度非酯化脂肪酸（NEFA, 0、0.6mmol/L、1.2mmol/L、1.8mmol/L）对体培养的皱胃平滑肌细胞（BSMC）活性、氧化应激指标、细胞凋亡相关蛋白表达等方面的内容；结果表明NEFA对体外培养的皱胃平滑肌细胞存在较大影响：1）细胞活性在NEFA浓度大于1.2mmol/L时，细胞活性显著低于空白对照组；2）氧化应激结果：细胞内MDA含量随NEFA浓度增加而增加；细胞内CAT酶活性随NEFA浓度增加而降低；细胞内SOD酶活性随NEFA浓度增加而降低；3）流式细胞计数发现从1.2mmol/LNEFA组开始，细胞凋亡百分数和死亡百分数就开始增加，说明NEFA有促进BSMC凋亡作用，而Western-Blot结果进一步证实这一结果。.本项目培养硕士研究生4人，其中3人在读，1人毕业。目前发表论文11篇（其中SCI 7篇，硕士毕业论文1篇，中文核心2篇）。