miR-483/483*在小鼠肝纤维化中调节肝星状细胞功能的作用机制研究

Liver fibrosis is a common pathological change in several chronic liver damage. There is high incidence rate of liver fibrosis in China which brought about huge burden. It is a key point of the activation and functional regulation of hepatic stellate cell for liver fibrosis and microRNAs are becoming a kind of important regulatory factor. Our previous results showed that miR-483 is upregulated in mice liver fibrosis which resulted from not hepatic stellate cells but hepatocytes. The results based on miR-483 transgenid mice suggested miR-483 played a negative role in liver fibrosis. We proposed a hypothesis: Hepatocytes secretes miR-483/483* to regulate the function of hepatic stellate cells by microvesicles (MVs). We would: (1) analyze the phenotype using the miR-483 transgenic and knockdown mice; (2) proof the relationships between miR-483/483* and hepatic stellate cells and hepatocytes; (3) confirm the targets of miR-483/483* in liver fibrosis. This project will improve the recognition to liver fibrosis mechanism and provide a base for new molecular therapy.

肝纤维化(liver fibrosis)是多种慢性肝病共同的病理学改变。我国是肝炎和酒精性肝病高发国家，肝纤维化人群数量众多，给社会带来沉重负担。肝星状细胞的活化及功能调节是控制其进展的关键，而微小RNA作为基因表达调控因子成为潜在靶点。项目组研究提示小鼠肝纤维化中miR-483含量升高源于肝细胞，并非肝星状细胞；且miR-483转基因小鼠在体结果显示其具有减轻纤维化的作用。基于国内外研究现状，项目组提出"肝纤维化中肝细胞能够通过微囊泡(MVs)分泌miR-483/483*调节肝星状细胞的功能"的假说。项目组拟利用已有的miRNA转基因小鼠，通过药物干预、表型分析等手段探索其与肝纤维化的关系；通过电镜及流式细胞等技术验证MVs与肝组织不同类型细胞的关系；利用报告基因系统证实其靶基因；同时探索防控策略。本项目将完善对肝纤维化发病机制的认识，为建立新的分子治疗策略提供基础。

肝纤维化是多种慢性肝脏疾病共同的病理学改变，是向肝硬化进展的重要环节。我国是肝炎和酒精性肝病高发国家，肝纤维化人群数量众多，给社会带来沉重负担。肝星状细胞的活化及功能调节是控制其进展的关键。本项目利用细胞及转基因小鼠模型对内含子编码的miR-483在小鼠肝纤维化中的作用进行探讨，并揭示其在肝纤维化发生时，在不同细胞间传递。提示miRNA能够作为肝纤维化发生时不同细胞间的信息分子。主要结果包括：miR-483抑制药物诱导的小鼠肝纤维化；该抑制作用是通过靶向抑制Pdgf及Timp2来完成的，其中miR-483在上述靶基因UTR中存在不同结合位点；在小鼠肝纤维化发生时，是肝细胞中miR-483通过以囊泡介导的形式向肝星状细胞中进行传递，进而发生上述的抑制作用。我们在研究过程中还关注了miRNA在细胞中的定位问题：迄今miRNA已被发现存在于胞浆、胞核和线粒体等亚细胞定位及细胞外。而在组织样本中，同一器官的不同组织细胞中也存在miRNA的差异表达。这一差异对临床诊疗有着重要意义。对含有不同组织细胞的临床样本中miRNA的定量应考虑上述差异表达情况。我们针对这一问题，通过荧光原位杂交实验对临床样本进行检测。结果提示U6分子存在这样的不同组织细胞表达差异，提示后续定量中内参的选择。本项目主要针对miRNA在肝纤维化中的作用展开研究，其成果发表4篇科技论文，培养博士生、硕士生合计6名，青年教师多名。项目经费使用情况基本参照计划任务书执行，试剂结余16.48元。依托本项目开展了与俄罗斯等国家研究机构的科研合作交流。