肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性CFH基因变异特征及杞黄颗粒干预机制

年龄相关性黄斑变性（AMD）是临床主要致盲眼病，近年研究表明补体因子H（CFH）基因变异与AMD发病密切相关，C等位基因是危险因子，我们前期研究显示杞黄颗粒对AMD患者和实验性视网膜光损伤治疗有效。本项目拟筛选肝肾阴虚型AMD患者，提取基因组DNA，用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法，观察CFH野生型和突变杂合子、突变纯合子片段三种基因型表现，选取每种基因型的PCR产物进行测序，验证结果，分析风险等位基因C的分布频率，揭示AMD肝肾阴虚型患者CFH基因变异特征；并经分组治疗后，采用酶联免疫吸附法，检测CFH浓度，反映其编码蛋白表达水平的变化，观察膜攻复合体（C5b-9）血浆含量，体现补体系统被异常激活后AMD致病物质的体内分布情况，同时就治疗前后CFH三种基因型表现频率进行对比，探明杞黄颗粒对CFH基因变异的干预机制，为杞黄颗粒的进一步开发应用奠定基础。

【项目背景】年龄相关性黄斑变性（AMD）是临床主要致盲眼病，近年研究表明补体因子H（CFH）基因变异与AMD发病密切相关，C等位基因是危险因子，我们前期研究显示杞黄颗粒对AMD患者和实验性视网膜光损伤治疗有效。.【研究内容】CFH基因型在肝肾阴虚型AMD患者群中的分布规律，杞黄颗粒对肝肾阴虚型AMD患者CFH基因变异的干预机制。.【重要结果】AMD患者治疗前C等位基因占18.33%。杞黄颗粒组治疗前后CFH Y402H基因型及C等位基因频率分布无统计学差异，但杞黄颗粒组与维生素C组比较，等位基因T/C频率分布有统计学差异，说明杞黄颗粒在等位基因T突变成风险等位基因C进程中有一定的干预作用；杞黄颗粒对AMD患者血清CFH因子表达量有上调作用，对sC5b-9有下调作用，杞黄颗粒比维生素C下调C5b-9的表达作用更显著。.【关键数据】治疗前所有120例AMD患者中，TT基因型76例，TC基因型44例，CC基因型未检出，其中TC基因占36.67%，C等位基因占18.33%。实验组治疗前后等位基因频率为T 78.23%/76.61%，C 21.77%/23.39%，治疗前后等位基因频率分布组间对比差异无统计学意义，但实验组和对照组治疗前后组内对比等位基因T/C频率分布有统计学差异。治疗组治疗前sCFH表达水平为249.27±82.14pg/ml，治疗后为338.22±88.06pg/ml，与对照组比较，治疗后差异有统计学意义。治疗组治疗前sC5b-9表达水平为78.10±28.05pg/ml，治疗后sC5b-9表达水为44.19±24.90pg/ml，与对照组比较治疗后差异有统计学意义。.【主要结论】杞黄颗粒对AMD患者血清CFH因子表达量有上调作用，降低风险等位基因C的分布，对sC5b-9有下调作用，充分显示出杞黄颗粒治疗AMD的科学依据。.【科学意义】以基因多态性为特征的CFH基因变异是AMD致病关键，降低风险等位基因C的分布频率，提高CFH表达水平，抑制补体激活通路，降低C5b-9浓度，有利于AMD的治疗。本项目研究主要证实杞黄颗粒对AMD患者血清CFH因子表达量有上调作用，降低风险等位基因C的分布，对sC5b-9有下调作用，充分显示出杞黄颗粒治疗AMD的科学依据。对进一步研究和开发AMD的中医药治疗方药具有深远意义。