人B7-H3受体的分子鉴定及其协同刺激作用的研究

B7-H3是最近发现的重要协同刺激分子，寻找其特异性受体是研究B7-H3生物学特性的重要部分。业已报道B7-H3介导正/负两种协同刺激作用，这可能与存在两个不同的受体相关。最近的研究发现，小鼠的B7-H3分子能与TLT-2分子特异性地结合，并能增强T细胞免疫应答。然而，人B7-H3受体（B7-H3R）尚待鉴定。.本项目旨在已有的研究基础上，(1)鉴定人TLT-2分子是否为B7-H3R，并将进一步探讨TLT-2介导的协同刺激作用；（2）根据预实验发现，表达在某人肿瘤细胞株表面的B7-H3R并不是TLT-2分子，采用生物信息学与分子生物学相结合的方法，克隆与人B7-H3融合蛋白结合的新分子，并分析其生物学特性及作用机制；（3）比较TLT-2与另一个新受体分子的异同及其可能的生物学特征。对人B7-H3R的鉴定是深入研究B7-H3信号途径的关键，具有理论原创性和潜在运用价值。

本课题围绕B7-H3受体分子的寻找开展系列研究，明确了先前提出的TLT-2分子与B7-H3的关系，人TLT-2分子并不能与人B7-H3分子结合。首次获得抗人TLT-2单克隆抗体，并以此通过流式方法分析了TLT-2在免疫细胞和肿瘤细胞表面的表达，发现在其在T细胞表面有微弱的表达，在单核细胞和B细胞表面有高表达。人TLT-2分子可促进T细胞增殖，促进单核细胞的活化和细胞因子如TNF-α和IL-6的分泌。首次通过免疫共沉淀的方法获得与B7-H3相互作用的分子B7-H3R相关分子，该分子在免疫细胞表面的表达与B7-H3融合蛋白在这些细胞表面的结合情况相一致，并分别能与2IgB7-H3和4IgB7-H3转基因细胞结合，此外H1299细胞中B7-H3分子水平的抑制也会降低B7-H3R融合蛋白与之结合的能力。在神经胶质瘤细胞株U87中，体外干预B7-H3表达水平可抑制B7-H3R相关分子的磷酸化，这表明B7-H3通过B7-H3R来传递信号。共聚焦分析发现，B7-H3和B7-H3R相关分子在U87细胞表面存在共表达现象，而免疫组化研究发现，在肿瘤胶质瘤组织中B7-H3与B7-H3R相关分子呈现的共表达与肿瘤的恶性程度呈正相关，表明B7-H3和B7-H3R相关分子的共表达可能与神经胶质瘤的肿瘤生长相关。这些研究结果将有助于我们进一步研究B7-H3信号在肿瘤免疫和肿瘤生长中的作用机制。