青藤碱对类风湿性关节炎相关模式识别受体及信号转导通路影响的研究

青藤碱具有祛风通络的作用，在临床上被广泛用于治疗风湿性疾病等。前期研究表明，Toll样受体（TLR）等模式识别受体（PRR）活化在类风湿性关节炎（RA）的发病和进展中具有重要作用；青藤碱能够下调RA患者树突状细胞（DC）的TLR2和TLR4表达，并抑制NF-kB的活化。由此，我们提出青藤碱可通过对PRR及信号转导途径的影响来治疗RA的假说。但青藤碱影响哪些PRR和信号转导未见报道。本研究拟用分子互作、共结晶质谱、RNAi和蛋白质组学技术对青藤碱影响的PRR进行研究，确定青藤碱对RIP2-IKK、RIP2-MAPK-JNK/Erk/p38或MyD88等信号转导通路的影响，以动物实验验证青藤碱对PRR的影响与治疗RA的关系。阐明青藤碱治疗RA的新机制和祛风通络的作用机理，并可能发现与RA相关的新受体或信号转导通路，为探索治疗RA新的作用路径奠定研究基础。

青藤碱在临床上广泛用于治疗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病，疗效确切，且有一定的安全性。前期研究结果显示青藤碱可作用于模式识别受体TLR2、TLR4，并抑制NF-κB的活化。由此推测青藤碱可通过对PRR及其信号转导途径的影响来发挥对RA的治疗作用。. 本课题利用完全弗式佐剂及胶原蛋白分别制备AIA和CIA模型，分时段取模型动物外周血及关节观察青藤碱的量效和时效关系。结果提示：. 1.中、低剂量青藤碱对RA模型有较好的疗效，给药第二周关节周径、足掌厚度明显小于模型组；. 2.青藤碱可抑制炎性细胞因子如RF、CRP、IL-1、IL-6、IL-12、IL-17、TNF-α、IFN-γ等的表达，促进抑炎因子如IL-10、TGF-β的表达；抑制关节滑膜及脾脏细胞TLR的表达；进而影响其下游信号通路转导，调控Treg/Th17细胞的平衡，呈现对类风湿性关节炎的治疗作用；. 3.应用流式细胞术、western blot、QPCR等技术均检测到青藤碱还可通过抑制DC细胞的成熟，促进其凋亡来减轻炎症反应，减轻对关节组织的破坏；. 4.液相芯片检测结果提示青藤碱可在一定时间内降低p38MAPK、JNK、c-jun 、和ERK蛋白磷酸化程度，升高MEK1的磷酸化程度，表明其可能通过影响DC2.4细胞内p38MAPK、JNK、c-jun 和ERK蛋白磷酸化程度来调控其信号转导功能，影响细胞因子的分泌，调控T细胞的分化和活化，从而干扰RA的病理进程；青藤碱可上调模型大鼠PBMC645条基因，下调202条基因。差异表达的基因主要集中于由12条参与集体免疫调节和细胞凋亡调控的信号转导通路构成的信号通路网；JAK-STAT信号转导通路变化最为显著。. 5.青藤碱可显著下调与JAK-STAT和TLRs信号转导通路关系密切的转录因子AP-1、p38和细胞因子IL-17、 CSF2的mRNA表达水平。. 以上结果提示：青藤作用于RA的途径可能是通过PRR影响其JAK-STAT、MAPK等信号通路发挥治疗作用的。这对于指导临床科学、合理应用青藤碱治疗类风湿性关节炎，提供了实验室依据；对于青藤碱的青藤碱的二次开发，应用于相关自身免疫性疾病的后续研究提供了思路。