异源二聚体介导的II型核受体环境内分泌干扰作用机理研究

部分核受体介导的效应是通过异源二聚体实现的，但是目前重组核受体基因酵母测试方法均不能有效检测异源二聚体介导的内分泌干扰效应。本研究利用酵母三杂交技术和rDNA介导的多克隆同源重组分子生物学手段，构建能够检测II型核受体的同源或异源二聚体形成相互作用的环境内分泌干扰物的检测新技术；并利用所开发的技术，研究在体外条件下典型环境内分泌干扰物的激动/拮抗作用机理，以及异源二聚体所发挥的作用。

异源二聚体作用模式是核受体作用机制的重要组成部分。本课题利用酵母三杂交技术，构建能够同时表达II型核受体RXRβ-LBD、TRβ-LBD以及共激活因子的三杂交酵母，考察了RXRβ-LBD在体外简化系统中在天然配体以及新型可疑内分泌干扰物暴露下的激动/拮抗作用，发现无论在天然配体或新型可疑内分泌干扰物的暴露下，RXR-LBD的存在不能促进或抑制TR-LBD与共激活因子GRIP1的结合。这可能与酵母系统未涉及可能在核受体异源二聚体通路作用中发挥重要作用的激素响应元件相关。此外，本研究利用同源重组技术对酵母基因组进行改造，构建以Luc为报告基因的荧光酵母菌株，可以适用于所有GAL4酵母双杂交系统，由于具有检测灵敏、便捷、易于定量的优点极具应用潜力。