血清抗瘤抗体检测对肝癌早期发现和广西HCC高危人群预警作用的研究

肝细胞癌（HCC）是广西高发恶性肿瘤，寻找有效的并与AFP互补的肝癌血清标记物对肝癌早期诊断及发病机制研究有重要意义。本课题组利用SEREX技术已筛选出多个新的肝癌肿瘤相关抗原(TAA)，发现肝癌患者血液中存在抗TAA抗体。通过基因工程技术制备了部分肝癌相关抗原重组蛋白，检测了多种肝病及其他肿瘤等病人血清中抗肝癌肿瘤相关抗原抗体（抗TAA抗体），证实抗TAA抗体主要出现在肝癌病人血清中，尤其在AFP阴性的肝细胞癌病人血清中阳性率最高。我们的研究显示检测肝癌病人血清中抗TAA抗体对肝癌的诊断有重要应用价值。本项目在前期筛选和验证肝癌TAA工作基础上，通过基因工程技术制备肝癌相关抗原，利用肝癌抗原蛋白作为关键试剂，建立抗TAA抗体的检测，在HCC高发区人群、高发区高危人群及HCC患者血清中检测抗TAA抗体并进行随访，建立抗TAA抗体与AFP联合应用于肝癌血清学早期诊断的指标体系。

寻找有效且与AFP互补的肝癌血清标记物用于肝癌早期诊断是项目主要目标。本项目在前期利用SEREX技术筛选到30个肝癌相关抗原（tumor-associated antigen in liver cancer, TAA）血清候选标记物基础上，进一步对SMP30、CNN2、GP73三个血清标记物与肝癌相关性进行验证；接着基因工程技术大量表达制备了这三种标记物的基因工程蛋白，以表达重组蛋白作为关键试剂，建立了检测血清抗SMP30、CNN2、GP73抗体的间接ELISA和双抗原ELISA方法；对广西肝癌人群、肝癌高危人群（慢性乙型肝炎、肝硬化）、其他肿瘤等血清进行抗肝癌相关抗原抗体（简称，抗TAA抗体）的检测和随访。结果，SMP30、CNN2、GP73表达水平及细胞行为学与肝癌关系密切，HCC患者血清存在有抗TAA抗体，抗SMP30抗体对肝癌检测阳性率明显高于非肝癌组，检测灵敏性32%，特异性97%，准确性78%。在AFP阴性的肝癌患者中，SMP30抗体阳性率为43.6%比AFP阳性血清高一倍，提示SMP30对AFP阴性的HCC病例诊断有较好弥补作用。组织病理分化较好（I~II级）的肝癌血清中，SMP30抗体阳性率明显高于病理分化差的血清。在肝癌小于3cm的早期，血清中已有39.5%抗体出现。抗CNN2抗体在肝癌、肝炎肝硬化、其他肿瘤、正常人组的阳性率分别是16.8%、7.1%、3.8%和1.0%。检测HCC的灵敏性为16.8%，特异性95.9%，准确性70.1%。在AFP阴性的HCC患者，有25.6%能检测到抗CNN2抗体，17%小肝癌病人检测到相应抗体。将SMP30抗体、CNN2抗体与AFP三者联合检测，HCC阳性检出率可提高至91.4%。双抗原夹心ELISA方法检测正常对照组、肝炎肝硬化组、原发性肝癌组血清的GP73抗体浓度分别为46.56±13.28ng/ml，142.34±18.26ng/ml，258.33±87.63ng/ml，三组有统计学意义。对SMP30抗体、CNN2抗体阳性及阴性的肝炎肝硬化高危人群进行随访一年，结果显示无论是抗体阳性或阴性的高危人群，没有出现肝癌恶变情况，即暂不能确定血清抗SMP30、抗CNN2抗体与肝癌发生之间的关系，可能与这类人群服用抗病毒药物有关，需进一步增加随访时间。本项目结果提示肝癌血清抗TAA抗体检测可作为肝癌早期诊断指标。