树突状细胞分泌的exosomes介导miR-155在小鼠三硝基苯磺酸诱发肠炎中的治疗作用及机制

肠黏膜树突状细胞（DC）过度活化是炎症性肠病(IBD) 的发病机制之一。miR-155表达异常与DC过度活化密切相关，上调miR-155在DC内的表达可能通过抑制DC过度活化对IBD起治疗作用。Exosomes是细胞分泌的一种纳米囊泡，最新的研究表明其可以在细胞间传递microRNA。基于我们利用DC分泌的exosomes介导IL-10治疗大鼠三硝基苯磺酸(TNBS)诱发肠炎的研究，我们设想：DC分泌的exosomes介导miR-155通过抑制肠黏膜DC过度活化在小鼠TNBS诱发肠炎中发挥治疗作用。因此，本项目拟在小鼠TNBS诱发肠炎的模型上，利用DC吞噬exosomes的特点，应用exosomes介导miR-155靶向至肠黏膜DC胞内，上调miR-155表达，通过抑制DC活化治疗TNBS诱发肠炎并进一步探讨其机制，从而为炎症性肠病免疫治疗策略提供新依据。

本研究旨在探讨树突状细胞（DC）分泌的exosomes介导miR-155在小鼠TNBS诱发肠炎中治疗作用及机制。体外诱导小鼠骨髓来源DC，LPS刺激成熟，鉴定表型，转染miR-155激动剂及抑制剂，收集转染后DC上清，离心获得exosomes，qRT-PCR显示转染miR-155激动剂的DC分泌exosomes胞内高表达miR-155。构建小鼠TNBS模型，分三组：对照组、miR-155激动剂组及miR-155抑制剂组（n=10），分别腹腔注射高低表达miR-155的exosomes（1μg/ml），每日观察小鼠疾病活动评分，第八天处死小鼠观察结肠大体形态、病理学及MPO评分，结果显示miR-155激动剂组小鼠肠炎症状改善明显，且该组结肠组织中促炎性细胞因子IL-2、IL-12、INF-γ及TNF-αmRNA表达下调，抑炎性细胞因子IL-10mRNA表达上调，上述结果表明高表达miR-155的DC细胞分泌的exosomes对小鼠TNBS肠炎有一定的治疗作用。分离各组小鼠结肠来源的固有层（LP）细胞，磁珠分选DC，荧光显微镜观察exosomes在DC表达，Western显示miR-155激动剂组LP来源DC先天免疫通路蛋白TLR2、TLR4、Myd88及NF-κB表达下调，MLR及上清ELISA检测显示该组LP来源DC刺激T细胞增殖能力降低，促炎性细胞因子IL-2、IL-12、INF-γ及TNF-α分泌减少，抑炎性细胞因子IL-10分泌增加，且LP中调节性T细胞数目上调。分离正常小鼠结肠LP细胞，与高低表达miR-155的exosomes共培养，Western显示miR-155激动剂组LP来源DC先天免疫通路蛋白TLR2、TLR4、Myd88及NF-κB表达下调， MLR及上清ELISA检测也显示该组LP来源DC刺激T细胞增殖能力降低，促炎性细胞因子IL-2、IL-12、INF-γ及TNF-α分泌减少，抑炎性细胞因子IL-10及TGF-β分泌增加，且诱导脾脏调节性T细胞数目上调。上述结果表明高表达miR-155的exosomes通过抑制肠黏膜DC的活化，抑制小鼠肠道的炎症反应，上调调节性T细胞表达，从而发挥对小鼠TNBS肠炎的治疗作用。本课题组紧跟目前炎症-肿瘤研究最新进展利用该项国家自然基金对小鼠从肠炎到肠癌建模的研究，成功制备出肠炎到肠癌的动态动物模型。