胰腺星形细胞对胰腺癌化疗耐药的影响及其机制的研究

肿瘤微环境介导的耐药是胰腺癌耐药的新模式，胰腺星形细胞（PSC）在其中的作用尚不清楚。本课题旨在探讨PSC在胰腺癌肿瘤微环境介导的耐药中的作用。首先，探讨PSC对健择诱导的胰腺癌细胞凋亡水平的影响。拟建立人PSC细胞系,与胰腺癌细胞进行对照，采用细胞外基质（ECM）基因芯片及细胞因子抗体芯片筛选出PSC高表达的ECM成份及可溶性因子；应用常规方法验证这些因子在PSC中的表达及其相应受体在胰腺癌细胞中的表达；进而将PSC与胰腺癌细胞共同培养，通过体内、体外实验阻断或活化胰腺癌细胞中这些因子介导的信号通路，研究其对健择诱导的胰腺癌细胞凋亡水平的影响及下游机制。另一方面，探讨胰腺癌细胞旁分泌蛋白sonic hedgehog(SHH)对PSC分泌能力的影响，并通过体内、体外实验分别在PSC和胰腺癌细胞中干扰SHH信号环路，初步研究SHH信号环路对健择诱导的胰腺癌细胞凋亡水平的影响。

本研究采用outgrowth及密度梯度离心方法分别分离培养了3例人胰腺癌及3例正常胰腺组织中的胰腺星形细胞（Pancreatic stellate cells，PSC）并通过α-SMA免疫荧光染色进行了鉴定，原代培养的PSC经2-3次传代后细胞纯度达100%。我们收集了胰腺癌中胰腺星形细胞2-6次传代时的条件培养基，并分别提取了胰腺癌及正常胰腺组织中胰腺星形细胞的mRNA，备后续试验用。我们Ion PGM™测序仪、流式细胞仪、分子生物学等技术手段，发现：（1）胰腺癌PSC的条件培养基（PSC-derived conditioned media ，PSC-CM）处理胰腺癌细胞后，健择（gemcitabine，Gem）诱导的胰腺癌细胞凋亡比例降低，胰腺癌细胞对Gem的耐受性增加。（2）PSC-CM处理胰腺癌细胞系后，胰腺癌细胞发生显著的上皮间质转化（epithelial–mesenchymal transition，EMT）的形态学改变，胰腺癌细胞逐渐呈细长梭形，并且出现多个分支。上述结果证实了PSC对胰腺癌耐药及EMT具有重要影响，PSC可能在胰腺癌肿瘤微环境介导的耐药中扮演着重要的角色。另外，我们前期的工作（如PSC-CM、PSC mRNA以及人胰腺癌标本收集等）也为后续机制研究打下了良好的基础。