FVIIa-TF-FXa复合物介导的血管内皮细胞保护机制在进展性脑挫裂伤出血中的作用

Progressive brain contusion hemorrhage is an important factor affecting the prognosis of patients with TBI. In a series of preliminary studies, we found that as the core in extrinsic coagulation pathway, lower levels of FVIIa directly involved in the progression of brain contusion hemorrhage. FVIIa not only reduce progressive hemorrhage by activating the extrinsic coagulation pathway, but also by maintaining integrity of microvascular. However, its molecular mechanism is still unknown. We will focus on our point to the mechanism. Therefore, we explore the direct activation of PAR2 receptors by FVIIa-TF-FXa complex and the indirect activation of PAR1 through EPCR by FVIIa-TF-FXa complex, analyze its downstream MAPK and NF-κB signaling pathway, and investigate the protection of barrier function by FVIIa-TF-FXa complex by using EPCR lowe endothelial cells, TF/EPCR expressing CHO cells, quantification of PARs cleavage, and FVII mutant. Finally, we fully explain the mechanism of FVIIa-TF-FXa complex in reduction of progressive brain contusion hemorrhage, which provides the theoretical basis and practical guidance for early intervention.

进展性脑挫裂伤出血是影响脑外伤患者预后的一个重要因素。在前期一系列的研究中，我们发现作为启动外源性凝血途径中的核心，血浆中FVIIa水平的降低直接参与了进展性脑挫裂伤出血的发生。FVIIa不仅通过直接外源性凝血途径减少血肿的进展，还可能通过维持微血管完整性减少进展性脑挫裂伤出血，其分子机制尚不明确。我们将以此为研究重点，联合运用EPCR low血管内皮细胞，TF/EPCR表达的CHO细胞，PARs酶切定量算法,FVII突变体等多种方法，探讨FVIIa-TF-FXa复合体对PAR2受体的直接激活作用，以及通过EPCR间接激活PAR1的作用，分析其对下游MAPK和NF-κB信号通路的影响。最后，研究FVIIa-TF-FXa复合体对内皮细胞通透性和骨架蛋白稳定性的维持作用，从而全面解释FVIIa-TF-FXa复合体在进展性脑挫裂伤出血中作用机制，为早期干预提供理论基础和实践指导。

进展性脑挫裂伤出血是影响脑外伤患者预后的一个重要因素。在前期一系列的研究中，我们发现作为启动外源性凝血途径中的核心，血浆中FVIIa 水平的降低直接参与了进展性脑挫裂伤出血的发生。FVIIa 不仅通过直接外源性凝血途径减少血肿的进展，还可能通过维持微血管完整性减少进展性脑挫裂伤出血，其分子机制尚不明确。我们将以此为研究重点，通过研究单纯性中重型颅脑创伤患者血浆FVIIa 水平的连续改变与挫裂伤脑进展性出血的关系，分析F7siRNA 小鼠脑挫裂伤区出血量，观察FVIIa 和TF 在挫裂伤区损伤血管内皮细胞的空间分布，探索FVIIa-TF-FXa 复合体对PAR2 受体的直接激活以及通过EPCR 间接激活PAR1 的信号通路，从而阐述“FVIIa-TF-FXa 复合体通过激活PARs 调控MAPK 和NF-κB 信号通路维持微血管内皮细胞稳定,从而参与调控进展性脑挫裂伤出血”的假说，为早期干预提供理论基础和实践指导。我们通过临床样本收集并检测患者血中FVIIa活性，发现单纯TBI早期FⅦ活性降低和血小板水平降低与PHI密切相关，对指导治疗PHI具有重要意义。在动物实验中，我们发现FⅦ给药组在损伤后3h至72h脑挫裂伤出血灶没有明显增大。FⅦ抑制组小鼠损伤后3，24，72 h的脑出血量均显著高于同时相点其他三组。另外，在FⅦ抑制组内，伤后72h脑出血量显著高于伤后3 h和伤后24 h；而在对照组和FⅦ给药组内，随着时间的推移脑出血量并无显著增加。在损伤后72h，FⅦ给药组的脑出血量显著低于损伤对照组。脑挫裂伤灶周围半影区组织CD31与TUNEL共染结果显示，相比损伤对照组和FⅦ给药组，FⅦ抑制组小鼠脑挫裂伤周围的血管内皮细胞凋亡更加显著。在损伤对照组中也能观察到内皮细胞凋亡，但FⅦ给药组却很少有内皮细胞凋亡的发生。另外，对脑挫裂伤灶周围半影区组织进行IgG染色结果显示，FⅦ抑制组小鼠脑挫裂伤周围的IgG渗出显著高于损伤对照组和FⅦ给药组，而FⅦ给药组的IgG渗出却显著低于损伤对照组。结果提示FⅦ对于脑挫裂伤灶半影区的血管通透性有保护作用。最后，细胞学实验结果显示FⅦa-TF-FXa三聚体复合物可能通过激活HUVEC的P44/42 MAPK 通路，并抑制HUVEC的NF-κB P65的通路来发挥细胞保护作用。