CHD6基因拷贝数变异在微卫星稳定性结直肠癌发生中的作用及机制研究

While the effects of heritable factors were observed in 35% colorectal cancer, only 5% of colorectal cancer was identified to have high-penetrance gene germline mutations. The susceptibility of most colorectal cancer and the molecular mechanism of genetic factors in carcinogenesis has yet to be explicated. Our prior studies showed that in microsatellite stable colorectal cancers there was increased frequency of CHD6-containing 20q12 segment gain. 45% patients with 20q12 gain showed CHEK2-containing 22q12.1 segment loss. The protein encoded by the CHD6 gene is thought to be a core member of one or more chromatin-remodeling complexes, allowing patterns of cell-type specific gene expression related to the cell cycle. The CHK2 protein encoded by the CHEK2 gene emerges as an important regular cell cycle checkpoint. Hence, we suppose that 20q12 gain may effect the CHD6 gene dose and inhibit the activity of proteins on the cell cycle checkpoint pathway, leading to the carcinogenesis of microsatellite stable colorectal cancer. To validate this hypothesis, real-time PCR, western blot, and RNA interference will be performed to detect the related biological functions of CHD6 in colorectal cancer tissues and cell lines. This project is to investigate CHD6's pathogenesis potential in the carcinogenesis of microsatellite stable colorectal cancers. The result might lay a foundation for uncovering the molecular mechanism of colorectal carcinogenesis and provide new ideas for colorectal cancer therapy.

35%的结直肠癌有遗传易感性，但只有5%由单个基因突变引起，大部分肠癌遗传易感性及作用机制不清。我们前期实验结果显示微卫星稳定（MSS）结直肠癌中20q12（CHD6基因所在区域）拷贝数扩增频率增高，45%病例同时伴22q12.1(含CHEK2基因)缺失。CHD6蛋白是染色质重塑复合体核心成员，CHEK2编码的蛋白是细胞周期检验主要成员。提示20q12可能通过CHD6影响细胞周期检验点通路活化，导致MSS结直肠癌发生。本研究拟以MSS结直肠癌组织和肠癌细胞系，采用荧光定量PCR、蛋白质印迹法、RNA干扰等手段，从分子、细胞及组织等多方面探讨CHD6在MSS肠癌发生中的重要作用，探索CHD6是否影响细胞周期检验点通路活化及其参与肠癌发生的分子机制。本研究将从CHD6扩增这个新视点为揭示MSS肠癌发生机制奠定基础，为肠癌的防治提供新思路。

CHD蛋白是染色质重塑复合体核心成员，在肠癌的发生发展中发挥重要作用。本课题通过运用采用荧光定量PCR、蛋白质印迹法、免疫组织化学法等方法与技术，对CHD6/7/8在结直肠癌作用中的分子机制进行了初步研究。首先通过收集根治术切除结直肠癌（CRC）组织及癌旁组织，用多重荧光PCR-高效毛细管电泳检测肠癌病例微卫星稳定状态；对收集病例根据临床病史进行分类，分为遗传性肠癌和散发性肠癌（SCRC）两类，最终筛选MSI HNPCC 28例，MSS HNPCC 44例，MSS SCRC 45例（共117例CRC）。通过Real time PCR 检测CRC配对肿瘤组织和正常粘膜中CHD6/7/8转录水平的表达情况，结果显示CHD6表达量较低，但发现CHD7mRNA和CHD8mRNA的表达在肿瘤组织中均有明显降低。免疫组织化学法检测CRC配对肿瘤组织和正常粘膜中CHD6/7/8蛋白表达，多次试验CHD6蛋白表达均不理想，推测可能与抗体有关，目前没有合适得CHD6抗体用于免疫组织化学法，而CHD7/8在SCRC癌组织中蛋白表达的缺失率高达60%，HNPCC 癌组织中CHD7、CHD8的表达缺失率分别为87%和75%。对所筛选组织随机抽取15例进行癌组织及癌旁正常粘膜组织提取蛋白进行western blot试验，结果CHD6蛋白在癌组织及正常肠粘膜组织中表达无显著差异。通过western blot，CHD6在7种不同的微卫星稳定性细胞株中有差异性表达。对CHD6表达较低的细胞株进行腺病毒包装使其过表达，但由于CHD6基因片段较大，现有技术难以完成病毒包装。综合上述结果，本研究为探讨CHD6在遗传学大肠癌中发生的重要作用奠定了坚实的工作基础。同时对于认识CHD6与结直肠癌之间的关系提供了重要的启示性线索。项目资助发表核心论文3篇。培养硕士生1名，在读。项目投入经费20.3万元，支出24.178万元，各项支出基本与预算相符。