沉默Bcl2基因提高溶瘤腺病毒抗肿瘤作用的机制研究

An oncolytic adenovirus called H101 has been clinically approved for the treatment of several malignancies in China. However, H101 has limited efficacy as a monotherapy in clinical practice. Previous study, the group tested a "double target" approach to antitumor therapy by combining H101 that targets the inactive p53 in tumors, with a small interfering RNA (siBCL2) that targets Bcl2. The combined treatment significantly enhanced the anti-tumor effect of H101 on cervical cancer. On the basis of preliminary studies, the project is planning to inverstigate the mechanism of enhanece the anti-tumor effect of adenovirus after interfering Bcl2, including the promotion of tumor cell apoptosis, tumor growth and survival. And will analysis the changes of tumor cell surface receptor CAR (coxsackievirus-adenovirus receptor) and the expression of some other oncolytic and death related genes (such as E1A13S, ADP). It will also plan to study the replication, transcription and translation of adenovirus in tumor cells and its effect on the adsorption and proliferation of tumor cells. The subject is expected to clarify the internal mechanism of anti-cancer effect of adenovirus when Bcl2 is interfered. It will provide a theoretical basis for oncolytic adenovirus drug better used in clinical.

重组人5型腺病毒（H101）注射液已被批准应用于临床。但单独使用H101的临床疗效有限，前期研究中我们利用Bcl2 自身具有的抗凋亡特性及其与p53之间的相互协调关系提出了以Bcl2与P53为双靶点、溶瘤腺病毒与小干扰Bcl2联合，同一载体给药的肿瘤基因治疗模式，明显增强了H101的抗宫颈癌的疗效。本项目拟在前期研究基础上，探讨干扰Bcl2作用后，增强腺病毒抗肿瘤作用的机理，包括促进肿瘤细胞凋亡、荷瘤鼠瘤体缩小、生存期延长等。并分析干扰Bcl2后，肿瘤细胞表面受体CAR变化；腺病毒基因在肿瘤细胞内复制、转录、翻译情况及其对肿瘤细胞的吸附和增殖能力的影响；以及其它一些与腺病毒溶瘤、致死相关基因（如E1A13S、ADP等）的表达变化。该课题有望阐明Bcl2基因被干扰后，腺病毒抗癌疗效提高的内在机理，为将H101等溶瘤腺病毒药物更好地应用于临床提供理论基础。

p53 基因是研究最早、最多的抑癌基因，是影响癌症发生的关键调控基因之一。绝大多数肿瘤细胞都存在 p53 基因异常或 p53 基因相关通路的异常。肿瘤发生时常伴随有多个遗传位点的变异，开展靶向多基因的肿瘤基因治疗研究最基本前提是选择合适的靶点。如上所述，p53基因是目前肿瘤基因治疗的首选理想靶点，因此再选择一个既可协同 p53 基因又最好具有单独疗效的第二治疗靶点是开展多靶点肿瘤基因治疗的关键。线粒体在凋亡过程中扮演着十分重要的角色， Bcl-2 家族的抗凋亡蛋白通过阻止线粒体融合，可强烈抑制凋亡。Bcl2 基因在正常细胞中不表达或低表达，而在大多数肿瘤细胞中过表达。p53 能通过直接干扰Bcl2/ Bax 复合物的形成，与存在于线粒体表面的 Bcl2 结合并形成凋亡复合物，促进 Bax 等促凋亡基因发挥功能。.在寻找第二靶点时，我们发现Hedgehog信号通路在UM中是高度激活的，Hedgehog信号通路与胚胎发育，干细胞分化与维持，创伤愈合，EMT，细胞增殖、分化、凋亡、自噬、迁移等密切相关，联合抑制Hedgehog信号通路关键节点Smo显著降低UM细胞增值和迁移。另外，发现CXCR4和ART3可促进UM发生远处转移，联合靶向CXCR和ART3对肿瘤细胞具有明显的杀伤作用。转录组深度测序结果表明，除了蛋白编码基因，一些既往被我们忽视的非编码基因，如长非编码RNA，microRNA，同样对肿瘤发生发展起着重要作用。长非编码RNA的表达具有时空特异性，在染色体修饰、转录、转录后多个层次都有调控作用。体外和体内实验表明，靶向长非编码RNA RHPNA-AS1, ANRIL,CANT1以及微小RNA miR-181b的基因治疗都能取得积极的抗肿瘤效果。综上所述，以p53为第一靶点的联合靶向蛋白编码基因及非编码RNA的基因治疗可有效增强对肿瘤细胞杀伤效果，为临床靶向药物研发提供可能。.从事与本研究项目相关的毕业博士2名、硕士2名；标注课题资助号的已经发表的论文13篇，其中SCI收录12篇（其中一篇接受），总影响因子45.986,影响因子大于5分的有3篇。