抗骨髓瘤细胞多克隆抗体抗肿瘤机制研究及其作用靶点鉴定

由于多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）的异质性和靶抗原局限性，目前单克隆抗体疗效有限，亟待寻求广泛表达的MM相关抗原和研发更有疗效的治疗药物。以往研究发现多克隆抗体- - 抗胸腺细胞免疫球蛋白（ATG）能够同时识别多个MM相关抗原，触发肿瘤细胞不同的凋亡信号通路，具有较好的治疗效果，提示多克隆抗体是一种有潜力的、针对多靶点的治疗MM药物。申请者分别利用小鼠和人多发性骨髓瘤活细胞免疫新西兰大白兔，纯化抗血清获得多克隆抗体。初步研究发现，制备的多克隆抗体能够特异性结合MM细胞，并且抑制MM细胞在体外和体内的增殖，延长荷瘤小鼠的生存期，而对正常小鼠脾细胞增殖没有明显影响。在此基础上，我们拟进一步探讨多克隆抗体治疗MM的分子机制，同时联合免疫蛋白质组学方法，对多克隆抗体识别的MM相关抗原进行筛选和鉴定，以期发现新的靶点，为研究新型抗MM靶向治疗药物奠定基础。

由于多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）的异质性和靶抗原局限性，目前单克隆抗体疗效有限，亟待寻求广泛表达的 MM 相关抗原和研发更有疗效的治疗药物。本课题利用小鼠和人MM活细胞免疫新西兰大白兔，纯化抗血清制备获得较高特异性的多克隆抗体，利用ELISA、细胞免疫荧光、Western Blot和动物模型方法均证实该抗体在体外和体内都具有一定的抗肿瘤活性，通过相关的机制探讨发现，该抗体的抗肿瘤活性与抑制肿瘤细胞增殖，诱发肿瘤细胞凋亡相关。同时利用2-D/western blot为基础的蛋白质组技术联用，我们证实了多克隆抗体可识别enolase、Adipophilin和HSP90s等9个蛋白质分子。进而，我们运用RNAi技术靶向enolase，探讨该基因在MM发生发展中的作用，发现将enolase沉默，MM细胞增殖明显受到抑制，肿瘤新生血管明显受到抑制，同时荷瘤小鼠体内VEGF、MMP2、MMP9表达与对照组相比明显降低，提示enolase可作为抗MM治疗的靶点。