基于ROS介导的P38MAPK/ERK信号通路探讨加味天雄散提高精子活力的作用机制

Asthenospermia is a obstinate disease,There were high incidences.Based on the theory of the correlation of spleen and kidney, Topic group compose modified Tianxiong power based tonifying kidney and strengthening spleen, and Clinical studies were found that is an effective cure and which is also the scavenging effect on oxygen free radical.Observing the effects of tonifying kidney and strengthening spleen on mouses learning and memory disturbance by orthogonal test and the ERK and P38MAPK in human sperm may be involved in the pathogenesis of asthenospermia,We proposed that Tianxiong power based tonifying kidney and strengthening spleen has regulative effects of these signaling pathways.To study the effect of modified Tianxiong power and its disassembled prescriptions in rat with asthenospermia.An enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and Westblotting was used, we assay SOD、MDA of parorchis to explore the correlation of ERK and P38 MAPK with sperm motility to research on the mechanism of improving sperm motility and provides a scientific theory for the treatment.This research provides a new idea of studying the basic components of the theory of the correlation of spleen and kidney

弱精子症是男科常见难治性疾病，发病率高，课题组基于脾肾相关论，在传统补肾治法上叠加健脾法组方加味天雄散，前期研究发现其具有较好的疗效，实验研究也发现其有清除氧自由基的作用，近年来发现活性氧（ROS）引起的线粒体损伤及由ROS介导的P38MAPK/EKR信号通路与精力活力密切相关，因此提出脾肾相关论和ROS介导的P38MAPK/EKR信号通路存在密切联系、加味天雄散可以调节此信号通路的假说，拟采用拆方研究方法，将全方组、补肾组、健脾组进行研究，以临床患者、弱精子症大鼠模型为研究对象，采用精液生化、酶联免疫、Westblotting等技术方法，测定附睾SOD、MDA水平以及精子的P38MAPK、ERK的磷酸化和蛋白表达水平以及与精子活力的关系，探讨加味天雄散通过抗ROS损伤与调节P38MAPK/EKR信号通路改善精子活力的作用机制，为临床治疗提供理论指导，并为脾肾相关论的物质基础研究提供依据。

1.项目研究的背景.男性不育症发病率高、发病机制不明，探讨弱精子症的治疗对于改善男性生育能力具有重要意义，线粒体产生的 ROS 在细胞的信号调节起着重要的作用，是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路强有力的激活剂，近年来发现ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平在弱精子症患者组显著升高，前期研究证实补肾健脾法疗效优于单一补肾法，补肾填精法调节MAPK信号通路的研究也越来越多，提出基于脾肾相关论的加味天雄散可以通过抗氧化和调节MAPK信号通路来提高精子活动能力的假说。.2.主要研究内容 .临床研究方面重点研究加味天雄散对弱精子症患者精液常规指标和精浆氧化损伤的影响，观察其对弱精子症患者精子p38MAPK 信号转导通路的变化，动物实验方面，采用腺嘌呤制备弱精子症动物模型，观察加味天雄散对少弱精子症模型大鼠精液常规指标和附睾氧化损伤的影响，观察其对弱精症子大鼠精子P38MAPK和ERK的磷酸化和蛋白表达水平影响。.3.重要结果和关键数据.临床研究结果发现弱精子症患者精浆SOD水平降低，精浆MDA水平升高，加味天雄散显著改善精子活力，提高精浆SOD水平，降低精浆MDA水平，能够提高精浆组织中的抗氧化水平；与正常组相比，弱精组患者精子ERK蛋白表达明显升高，精子P38表达及PP38明显升高，加味天雄散可显著降低ERK、P38蛋白表达水平及P38磷酸化水平，初步认为补肾健脾治法改善弱精子症患者精子活力，可能与抑制p38MAPK信号通路有关。.动物实验方面，探讨阿拉伯胶助溶后的腺嘌呤对 Wistar大鼠生殖毒性的时效和量效关系，发现采用腺嘌呤最佳浓度100mg／ml，1ml/(100g•d)剂量，加味天雄散显著提高了生精障碍大鼠模型的精子密度和精子活率，显著提高附睾内SOD 的活性，降低附睾组织中MDA 水平，能够提高附睾组织中的抗氧化水平，加味天雄散全方组可显著降低少弱精症子大鼠模型精子ERK、P38蛋白表达水平及P38磷酸化水平。.4.科学意义.本研究以不育中最常见的弱精子症为载体，进行三种中医治法的比较，从临床研究和动物实验两个方面发现补肾健脾治法改善弱精子症患者精子活力，可能与抑制p38MAPK信号通路有关，从信号转导通路方向研究说明补肾健脾法治疗弱精子症的作用机制，对于完善脾肾相关论、促进其理论物质基础研究、提供相关的实验依据有着重要的意义。