猪流行性腹泻病毒S蛋白B细胞表位鉴定与功能研究

Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) may cause porcine epidemic diarrhea, leading to severe economic loss in pig industry. The spike (S) protein of PEDV is an immunogenic antigen, which is responsible for eliciting immune response. At present, no information regarding fine mapping of B cell epitopes in the PEDV S protein is reported. In this study, we will express PEDV S protein, generate its monoclonal antibody (mAb). The purified mAb will be used as target for a biopanning with phage display random peptide library. By DNA extraction, PCR and sequencing, we will identify B cell epitopes in the PEDV S protein. In addition, the function of these epitopes will be characterized by immunofluorescence assays, quantified PCR and virus neutralizing assays. This work will be a basis for investigating invasion mechanisms of PEDV in-depth.

猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻(PED)给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV的囊膜纤突（Spike, S）是主要的免疫原蛋白，可诱导中和抗体产生并提供免疫保护。目前尚无精确定位PEDV S蛋白B细胞表位的报道。本研究拟表达PEDV S蛋白，制备PEDV单克隆抗体。将纯化的抗体与表达复合外源多肽的噬菌体库进行生物淘选鉴定与该单抗能特异结合的噬菌体。通过DNA提取，PCR和基因测序鉴定PEDV S蛋白B细胞表位。通过免疫荧光实验、定量PCR和病毒中和实验等特性PEDV B细胞表位在抗PEDV感染中的作用机制。本项目将为深入研究PEDV侵染机理研究奠定基础。

猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV的囊膜纤突（Spike, S）是主要的免疫原蛋白，可诱导中和抗体产生并提供免疫保护。目前尚无精确定位PEDV S蛋白B细胞表位的报道。本研究成功表达PEDV S1蛋白，重组蛋白分子量大小为60 KD，免疫BALB/c小鼠采用杂交瘤技术获得1株能稳定分泌抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体5E12。以纯化的小鼠单克隆抗体腹水为模板与表达复合外源多肽的噬菌体库进行生物淘选鉴定与该单抗能特异结合的噬菌体。通过DNA提取确定10个亲和噬菌体核苷酸序列并推导出其氨基酸序列分别为LMQINPTYYQIM(L), WSFNPSTYTIAG(W) 和 HDFVADMYQLAQ(H)。生物公司合成亲和多肽后，分别以病毒蚀斑、荧光定量PCR和免疫荧光实验对亲和多肽抑制病毒感染的效率进行了检测，结果表明L肽和W肽对PEDV的抑制率最高，而H肽的抑制效果较差。经序列比对表明“MQFNPTYYQLA”可能作为PEDV S1蛋白单克隆抗体5E12的配体模拟表位，其与PEDV S1蛋白201-212位的序列“MQYVYTPTYYML”有最高的相似性。并且与PEDV S1蛋白B细胞表位的生物信息学分析结果相符。故推断基序201MQYVYTPTYYML212 是PEDV S1 蛋白的模拟表位。本项目将为深入研究PEDV侵染机理研究奠定基础。