Dectin-1介导的固有免疫在真菌性角膜炎中的作用及机制研究

真菌性角膜炎是我国首位的感染性角膜病，其病变过程与角膜抗真菌的固有免疫反应密切相关。本研究拟从体外细胞培养及动物模型实验两个方面分析人角膜上皮细胞抗真菌感染中固有免疫的重要模式识别受体Dectin-1的作用，通过Northern blot、Western blot等分子生物学手段和激光共聚焦显微镜技术等定位方法从基因和蛋白水平展开研究，明确Dectin-1的胞内信号传导通路，分析相关炎症因子、趋化因子与Dectin-1传导通路各环节间的关系以及与TLRs、NLRs等主要模式识别受体在固有免疫中的交互作用，确定Dectin-1在复杂免疫网中的特殊意义，观察干预Dectin-1的表达后对真菌性角膜炎病变过程的影响，从而较为全面的论证Dectin-1介导的固有免疫在真菌性角膜炎中的作用及机制，进一步解释真菌性角膜炎的致病机制、寻找有效的药物作用靶点，从而为真菌性角膜炎的治疗提供新的思路。

1、项目背景：真菌性角膜炎是致盲率极高的感染性角膜病，药物和手术治疗效果并不十分理想，寻找其关键的致病机制是目前的研究难点。真菌性角膜炎的病变过程与角膜抗真菌的固有免疫反应密切相关，Dectin-1作为模式识别受体参与这一进程。但截止本项目开始前，Dectin-1在真菌性角膜炎发病中的具体作用及机制尚未阐明。.2、主要研究内容：（1）以角膜上皮细胞为研究对象，研究真菌刺激人角膜上皮细胞后Dectin-1的作用及机制。研究Dectin-1信号通路中syk、PKCδ等的作用，对IL-1β、IL-33等下游炎症因子和IDO的影响，与TLR2、LOX-1等模式识别受体的交互作用。（2）以真菌性角膜炎动物模型为研究对象，研究真菌感染角膜时Dectin-1的作用及机制。研究固有免疫阶段Dectin-1信号通路中syk、Raf-1等的作用，对IL-1β、TNF-α等下游炎症因子的影响，与TREM-1的交互作用。（3）以真菌性角膜炎病人为研究对象，研究Dectin-1参与角膜抗真菌感染的作用及机制。研究患者病变角膜中Dectin-1的表达，中国北方汉族人群Dectin-1、TLR4等的基因多态性与真菌性角膜炎的相关性。.3、重要结果：（1）在国内外首次证实Dectin-1参与人角膜上皮细胞抗真菌感染的固有免疫反应，通过与LOX-1等的交互作用，启动信号传导通路中syk、PKCδ的活化，通过影响IL-1β等下游炎症因子以及限速酶IDO的表达参与抗真菌免疫。（2）在国内外首次证实Dectin-1-/-小鼠的中性粒细胞被真菌刺激后，pro-IL-1β的表达较C57BL/6小鼠减少，Dectin-1通过与TREM-1的交互作用共同调节下游炎症因子的表达。（3）在国内外首次证实中国北方汉族人群Dectin-1 rs3901532等位点多态性与真菌性角膜炎的易感性无关，TLR4基因的rs10983755位点多态性与真菌性角膜炎的发病密切相关。.4、科学意义：从体外细胞实验、动物模型实验及基因组学研究等多方面较为全面的论证模式识别受体Dectin-1在真菌性角膜炎发病中的作用及机制，从Dectin-1及固有免疫的角度进一步丰富了真菌性角膜炎致病机理的知识框架，并从理论研究的角度探索Dectin-1及其相关信号通路节点作为药物作用靶点的可行性，从而为真菌性角膜炎的治疗提供了新的思路。