CRHR2基因rs2267716多态性影响原发性肝细胞癌易感性的作用机制研究

原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见恶性肿瘤,其发生发展是多基因参与的渐进式变异积累转化过程，与个体基因单核苷酸多态性密切关联。本课题在前期上千例大样本筛选HBV感染相关的HCC易感基因研究中发现，HCC与促肾上腺皮质素释放激素受体2(CRHR2)中rs2267716位点SNP显著相关，并发现该SNP与CRHR2基因转录水平有关。CRHR2作为激素受体，参与了皮质激素的内吞和胞内信号传导，而该基因是否能够在HCC的发生发展中影响肿瘤生长和转移仍有待深入研究。基于前期研究基础，本课题通过进一步扩大病例，对HCC与rs2267716位点的关联性进行分层分析，明确该SNP与我国HBV感染相关的HCC易感性及其恶性程度之间的关系，并且从转录调控、可变剪接、DNA甲基化、microRNA形成等多方面探讨该SNP在HCC发生发展中的生物学意义，进而阐明CRHR2基因该SNP对HCC发生发展的影响及机制。

原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见恶性肿瘤,其发生发展是多基因参与的渐进式变异积累转化过程，与个体基因单核苷酸多态性密切关联。本课题在前期上千例大样本筛选乙肝后肝癌易感基因研究中发现，肝癌易感性与促肾上腺皮质素释放激素受体2(CRHR2)中rs2267716位点单核苷酸多态性显著相关，C等位基因在乙肝后肝癌患者的分布频率显著高于健康对照和单纯乙肝携带者人群。本项目旨在进一步扩大验证，明确该相关性，并且从功能上其中的生物学意义，进而阐明CRHR2基因该SNP对HCC发生发展的影响及机制。.项目开展初期，我们再次收集样本对该位点与肝癌相关性进行了第二轮病例-对照研究，发现该位点基因分型结果与第一批所得结果一致，再次证明了其与乙肝后肝癌易感性的相关性，提示C等位基因具有增加乙肝后患癌的风险。同时，我们分别在RNA和蛋白水平检测了CRHR2在乙肝后肝癌患者组织中的表达水平，结果发现该位点多态性与其基因转录水平及蛋白水平有关，CC基因型携带者的肝脏组织内CRHR2水平高于其他基因型携带者，并且主要体现在癌旁组织中。功能研究方面，我们使用pGL-3荧光素酶报告系统，克隆rs2267716位点上下游1kb序列，将所构建重组子转染细胞后检测该位点的潜在转录调控功能。结果发现rs2267716位点C等位基因具有启动子转录活性，报告基因表达水平显著高于T等位基因。除此之外，我们也利用了大量生物信息学手段从可变剪接、DNA 甲基化、microRNA 形成等多方面探讨该多态性位点在乙肝后肝癌发生发展中的生物学意义，遗憾的是未获得该多态性与上述方面有相关性的信息。与此同时，我们对其它基因的多个SNP位点与肝脏疾病尤其是肝癌的关系进行了探讨，发现趋化因子CXCL14基因中rs2237062位点多态性与HBV相关的HCC肿瘤进程发展有关，以及TGFβ1 基因多态性位点codon10能影响其分泌在肝细胞中的功能，上述研究发表了两篇SCI收录论文。.终上所述，我们通过两轮病例-对照研究，发现了CRHR2基因rs2267716位点多态性与中国人群乙肝后肝癌易感性有关，且在RNA和蛋白两个水平证实了该位点多态性与肿瘤组织中CRHR2基因的表达量有关，此外在功能上发现该位点的多态性影响了基因的转录活性，提示了其影响肝癌易感性的调控机制。而CRHR2影响乙肝后肝癌的发生发展的体生物学机制仍有待深入研究。