转甲状腺素蛋白在糖尿病视网膜病变新生血管生成中的阻遏作用及机制研究

Diabetic Retinopathy (DR) is an important ocular diseases leading to blindness; and in the development of DR, retinal neovascularization should be one of the most vital cause of blindness. Therefore, to research the inhibition of retinal neovascularization in DR is of great significance in both of theoretical and clinical fields. It has been reported that TTR could inhibit the proliferation and migration of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). And in our previous work, TTR could significantly reduce the proliferation rate of human retinal microvascular endothelial cells (hRECs), but the molecular mechanism is still unclear. In this research, the relationship between TTR and angiogenesis, the functional and structural diversification of TTR under pathological conditions, and the effects of TTR on the proliferation and migration of hRECs should be studied in vivo and in vitro. Furthermore, with molecular and immunological methods, the target site of TTR for inhibition of retinal neovascular would be reflected. This work is to reveal the inhibition mechanism of TTR against retinal neovascular of DR, and to provide theoretical basis for the rational therapy of DR.

糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy, DR）是重要的致盲眼病，在其发展过程中，视网膜新生血管的产生是导致失明的重要原因。因此，抑制糖尿病视网膜新生血管的研究具有重要理论和临床意义。目前研究发现，转甲状腺素蛋白（Transthyretin，TTR）可以对人脐静脉血管内皮细胞的增殖及迁移有一定的抑制作用。申请人前期实验提示TTR对人视网膜微血管内皮细胞的增殖有抑制作用，但作用靶点及机制尚不清楚。本研究拟在体内体外实验中，解析TTR与DR视网膜新生血管生成的关系，分析病理条件下TTR结构和功能的变化；研究TTR对血管内皮细胞增殖和迁移的影响，并进一步利用分子生物学，免疫学等手段探索TTR抑制新生血管生成的作用靶点，揭示其作用机制。为DR发病机制的研究提供新线索，为有效控制DR视网膜新生血管的形成提供新思路。

糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy, DR）是重要的致盲眼病，在其发展过程中，视网膜新生血管的产生是导致失明的重要原因。因此，抑制糖尿病视网膜新生血管的研究具有重要理论和临床意义。目前研究发现，转甲状腺素蛋白（Transthyretin，TTR）可以对人脐静脉血管内皮细胞的增殖及迁移有一定的抑制作用。本项目首先以转甲状腺素蛋白（TTR）作为研究对象，研究TTR在不同环境下对视网膜微血管内皮细胞（hRECs）的作用，并模拟眼部病理环境构建共培养细胞体系进一步探索TTR 对hRECs细胞增殖过程中 VEGF, VEGFR1，VEGFR2，Angpt1，Angpt2 以及 Tie-2 等基因转录水平的影响。鉴于TTR在DR发病中的重要作用，我们利用亲和纯化技术联合质谱鉴定，筛选出可能与TTR相关的蛋白分子，进一步探讨TTR在DR发病过程中对视网膜新生血管的阻遏作用机制。.在模拟的高血糖和缺氧DR环境中，通过添加外源性（4 μmol / L）或内源性过表达TTR均可抑制hRECs的增殖，迁移和血管形成；此外，在高血糖和高血糖/低氧环境下，外源性TTR使Tie2和Angpt1 mRNA水平升高，而VEGFR1，VEGFR2和Angpt1则被抑制。初步发现TTR可以通过Tie信号通路对新生血管的生成产生抑制作用。.在模拟缺氧的环境中TTR可诱导hRECs凋亡。免疫荧光染色显示TTR可以进入hRECs的细胞核。质谱法鉴定了30个独特的TTR捕获蛋白，葡萄糖调节蛋白78（GRP78）是最丰富的蛋白之一。通过免疫印记和基因敲减技术表明TTR可能通过eIF2α/ CHOP途径上调GRP78并促进细胞凋亡。由此发现GRP78在高糖缺氧的环境下通过激活线粒体凋亡途径对血管凋亡产生作用。由以上研究成果最终揭示了TTR在DR病程不同阶段对血管新生的抑制作用机制，为DR的机制探索提供新的理论依据。