E2F2在调控RA滑膜成纤维细胞活性中的作用及机制研究

Rheumatoid arthritis(RA) is a kind of autoimmune disease. Hyperplasia and inflammation of synovium , formation of pannus are main pathology characteristics of RA. The mechanism of rheumatoid arthiritis is still unclear. We formerly found E2F2 to be overexpressed using Illumina beadchip. It’s just the upstream gene of PCSK6, which was tested to be related with RA in our former NSFC for youth. We also tested that silence of E2F2 can decrease the proliferation, invasion, and migration of fibroblast-like synoviocytes from RA patients. These results suggested that E2F2 may be involved in pathological process of RA, but the mechanism is still unclear. In this study, synoviocytes from RA and CIA models are used to investigate the role of E2F2 in RA. We aim to elucidate the cause of E2F2 elavation. To demonstrate its mechanism and pathway in RA, microarrays will be used to screen the genes and pathways downstream of E2F2. The aim of this study is to know the mechanism and pathway of E2F2 in RA, and set up E2F2 related pathological pathway. It can provide theoretical and experimental evidences for new clinical diagnosis target finding.

类风湿性关节炎（RA）是一种自身免疫疾病，滑膜增生、炎症和血管翳是其主要病理特征，滑膜成纤维细胞在RA病变中起重要作用。我们采用芯片筛查发现E2F2在RA滑膜中高表达，该分子正是申请人在国青基金发现的与RA病变密切相关分子PCSK6的调控分子。在此基础上，我们前期的预实验数据显示E2F2受炎性因子调节，与RA滑膜细胞的增殖、迁移和侵袭相关，这都提示E2F2可能参与了RA致病过程，但其作用机制和调控机制尚不明确。本项目拟利用原代培养的RA滑膜细胞和胶原诱导的关节炎动物模型，研究E2F2对RA滑膜细胞生物学活性以及RA动物模型发病的影响；揭示调控E2F2表达和活性的机制；通过高通量芯片平台筛选E2F2下游调控分子及其参与的信号通路，系统阐明其致病机制和途径。本课题旨在明确E2F2在RA病变过程中的作用及其分子调控机制，建立以E2F2为中心的致病途径，为寻找RA临床诊治新靶点提供理论与实验依据。

类风湿关节炎（RA)是以关节炎症为主要表现的慢性自身免疫性疾病，滑膜过度增生、血管翳形成是RA关节破坏的主要原因。因此，调控成纤维样滑膜细胞的（RASFs）的增殖、迁移和侵袭可能是预防和治疗关节破坏的新方法。本课题组前期研究表明E2F2可能与RA关节关节滑膜的增殖/迁移密切相关，具体机制不明。本研究通过体内和体外实验，进一步探讨E2F2参与调控RASFs增殖、迁移、侵袭的分子机制。.研究内容包括：.① E2F2在RA滑膜中的表达及对RA滑膜成纤维细胞增殖、侵袭、迁移、炎性因子分泌、细胞周期和细胞凋亡的变化等生物学功能的影响、对细胞自噬和相关marker表达的影响；E2F2敲除对小鼠CIA发生的影响；.② E2F2调控RA FLS生物学活性的分子机制.构建E2F2沉默慢病毒，稳定转染RA FLS细胞，RNA-Seq筛选出E2F2的下游靶基因并进行验证；在此基础上，采用蛋白芯片筛选E2F2可能调控的信号通路；明确E2F2通过哪个靶分子或信号通路发挥作用。.③ 探讨调控RA FLS中E2F2表达和活性的机制. 探讨LPS、IL-17等炎性因子对RA FLS中E2F2表达的影响。.主要研究结果包括：.①E2F2 在 RA 滑膜组织中高表达，并参与 RASFs的异常增殖、迁移、侵袭，促进炎症因子的产生。在炎症条件下，炎性因子 TNF-α、LPS、IL-6 均可诱导 RASFs 中 E2F2 的表达；在 RASFs 中存在 NF-κB/E2F2 / IL-6 之间的正反馈循环。动物实验发现E2F2 敲除能够显著抑制 IL-1α，IL-1β 和 TNF-α 等促炎因子的表达进而抑制胶原诱导关节炎的发生与发展；.② E2F2 能够直接结合到 STAT1 和 Myd88 的启动子区促进STAT1-Myd88 复合物的形成进而激活STAT1 通路和Myd88-PI3K/AKT/NF-κB 通路促进IL-1α、IL-1β 和 TNF-α 等关键促炎因子的表达最终促进关节炎的进展。 .③ 发现E2F2 及其相互作用蛋白 EIF5A 能够以复合体的形式结合到 ATG9A 的启动子区直接调控其转录从而促进自噬；EIF5A 作为翻译起始因子除了已知的翻译调控功能外还能够依赖于转录因子 E2F2 对转录进行调控；E2F2和EIF5A的特异性抑制剂均可缓解CIA小鼠的关节炎症状和发病率。