基于“痰瘀交互”理论的冠通方及其拆方对大鼠颈总动脉球囊损伤后再狭窄的影响及机制研究

Guantong Decoction is set based on the theory that the pathogenesis of vascular resenosis (RS) after percutaneous transluminal coronary angioplasty (PTCA) is interaction of phlegm and blood stasis. Preliminary research has shown that Guantong Decoction could decrease the occurrence rate of RS after PTCA, but its mechanism remains unclear. Literature research showed that the RS formation of blood vessels is closely related to the VSMC migration, proliferation and secretion of ECM, and VSMC migration, proliferation and secretion of ECM are closely related to MMP-2, TIMP-2 and ERK, TGF - beta/smads pathway. So in this research, RS rat model will be reproduced by carotid endarterectomy. Real-time PCR and Western blot will be used to detect the gene expression and protein expression of MMP-2, TIMP-2, ERK, and ERK1, ERK2, TβRI, TβRII, Smad2, Smad4, Smad .etc in the TGF-β/smads pathway. The research is aimed to reveal the treatment mechanism of Guantong Decoction and its separated prescriptions on the resenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty, which could verify that interaction of phlegm and blood stasis is TCM pathogenesis of PTCA-induced resenosis. The results can provide basis for scientific connotation of TCM in treating PTCA-induced resenosis, and have important academic value and application prospect for the prevention and treatment of vascular restenosis.

冠通方是基于PTCA 术后血管再狭窄（RS）“痰瘀交互”之病机立法遣药组方。课题组前期研究表明冠通方能降低PTCA术后RS率，但其作用机制尚不清楚。文献研究表明血管RS的形成与VSMC迁移、增殖及ECM分泌密切相关，而VSMC迁移、增殖及ECM分泌与MMP-2、TIMP-2及ERK、TGF-β/smads通路关系密切。因此本项目采用大鼠颈总动脉球囊内皮剥脱术制备RS模型，应用Real-time PCR、Western blot等技术检测MMP-2、TIMP-2及 ERK、TGF-β/smads通路中ERK1、ERK2、TβRI、TβRII、Smad2、Smad4、Smad7等因子的基因和蛋白表达变化，揭示冠通方及拆方防治PTCA术后RS的作用机制，印证痰瘀交互是PTCA术后RS的中医病机，为中医药防治PTCA 术后 RS 的科学内涵提供依据，对防治血管再狭窄具有重要的学术价值和应用前景。

PTCA术是冠心病的主要治疗手段之一，但术后再狭窄（RS）率高严重制约了其远期疗效。文献研究表明血管RS的形成与VSMC迁移、增殖及ECM分泌密切相关，痰瘀交互是PTCA术后RS的中医病机。冠通方基于PTCA术后RS“痰瘀交互”之病机立法遣药组方，前期研究表明其防治血管再狭窄具有良好的疗效，但其作用机制不明确。本项目采用球囊内膜剥脱术模拟冠心病PTCA术后再狭窄建立大鼠颈总动脉再狭窄动物模型，动态观察冠通方对大鼠PTCA术后第1、7、28天三个时间点颈总动脉TGF-β/smads信号通路中关键因子的mRNA和蛋白表达的影响。实验结果总结如下：①通过在光学显微镜下观察颈总动脉的形态改变，透射电镜观察颈总动脉中、内膜的超微结构，免疫组化法检测颈总动脉PCNA的表达，明确成功建立了大鼠颈总动脉再狭窄动物模型；②硝酸还原酶法测定血清NO含量和ELISA法测定血清ET-1、IL-6、TGF-β、MMP-9含量结果：与正常组比较，术后第1、7天模型组大鼠NO含量均显著降低，术后1、7、28天，血清ET-1、IL-6、TGF-β、MMP-9含量均显著升高；冠通方可升高NO含量，降低ET-1、IL-6、TGF-β、MMP-9含量；③Real-time PCR和Western blot检测颈总动脉MMP-2、TIMP-2、ERK1、ERK2、TβRI、TβRII、Smad2、Smad4、Smad7等因子的mRNA和蛋白表达：与正常组比较，第1、7、28天模型组大鼠颈总动脉MMP-2、ERK1、ERK2、TβRI、TβRII、Smad2、Smad4的mRNA和蛋白表达均显著上调，其中第7天表达最高，冠通方可下调其表达；而术后第1、7、28天TIMP-2、Smad7mRNA和蛋白表达则下调，其中第7天下调最显著，冠通方可上调其表达。本课题研究结果揭示冠通方防治PTCA术后RS的作用机制可能通过下调MMP-2、ERK1、ERK2、TβRI、TβRII、Smad2、Smad4以及上调TIMP-2、Smad7等因子的基因和蛋白表达，从而抑制VSMC的增殖、迁移以及ECM的分泌，减缓血管内膜的增厚与血管重塑，进而达到防治血管再狭窄的目的。拆方研究印证痰瘀交互是PTCA术后RS的中医病机。