MiR-302调节TRIM24参与分化型甲状腺癌131I耐受机制

131I　treatment is the first choice for patients who suffer from DTC with distant metastasis.Some 75% differetial thyroid cancer will become Radioctive Iodine Resistant/Refratory (RAI-R DTC).the mechanisms however,remain largely to be elucidated. The proviously work performed by appliciant with serum microRNA array have found that miR-302 was the most downregulated microRNA which conducted before and after RAIR in 3 DTC patients.Further work have uncovered a new putative target of miR-302-TRIM24.We therefore proposed a hypothesis that miR-302 would be involved in RAI-R DTC by targeting TRIM24 and affecting 131I uptake and iodine-handling proteins. We are to construct of miR-302 overexpression and downregulation model in DTC cell lines to systemetic investigate the effect of miR-302 on 131I uptake and iodine-handling proteins at DTC cells and to further address the mechanisms of miR-302 regulating TRIM24 involve RAI-R DTC.Our research will discover the mechanisms of RAI-R DTC based on the novel point which may provide new insight into therapy of DTC and reverse the RAI-R DTC.

放射性碘-131是分化型甲状腺癌（DTC）远处转移的首选治疗方法，但约75%左右分化型甲状腺癌患者会发生性放射性碘131耐受（RAI-R）。目前DTC发生RAI-R机制尚不清楚。申请人前期实验通过血清microRNA芯片对发生RAI-R的DTC前后患者血清中miRs表达变化进行筛查。发现miR-302在DTC发生RAI-R时降低最明显，干扰miR-302表达能显著下调DTC细胞摄碘能力，并确定了miR-302的靶基因-TRIM24。据此提出假说：miR-302可通过调控TRIM24影响摄碘及碘处理相关蛋白表达，进而参与RAI-R DTC发生。我们拟建立miR-302过表达及干扰模型，阐明RAI-R发生过程中miR-302对DTC细胞的摄碘能力及对碘处理相关蛋白表达的影响，系统探讨miR-302调控RIM24进而参与RAI-R的分子机制，本课题对治疗DTC及逆转RAI-R具有重要的临床意义。

DTC发生碘耐受是甲状腺癌晚期非常差的预后因素，本研究的主要内容是miR-302在DTC发生碘耐受过程中的机制研究。实验结果显示：一，在细胞水平机制方面：两株DTC细胞中miR-302 过表达均能显著增加细胞的碘吸收，同时，碘处理相关蛋白表达量也明显增加；相反，稳定干扰miR-302，也会显著抑制对碘处理基因（NIS，TPO，TG，TSHR和Pendrin）的表达的影响，通过碘131处理后形成的碘耐受细胞株中亦存在相似的表达模式。通过双荧光素等实验结果验证：Trim24是miR-302的一个非常重要的靶基因。通过免疫共沉淀实验证实：PAX8与TRIM24和NKX2-1三者可以形成三聚复合物；并通过双荧光素报告实验证明，TRIM24与NKX2-1 和PAX8三者形成的复合体可以结合到碘处理基因（NIS，TPO，TG，TSHR和Pendrin）的启动子区域，并促进其表达。因此得出结论：miR-302/Trim24调节轴的机制之一是通过结合碘处理基因启动子而影响碘处理基因表达，进而影响碘吸收。另一方面，我们也通过启动子结合实验发现Trim24能够显著促进糖无氧酵解的能量代谢--细胞外酸化速度(ECAR)和细胞氧消耗率(OCR)。其机制是通过促进糖代谢相关基因的表达，这些基因包括HK2，PGM1，ENO1，GPI，PDK1，LDHC和PKM2等。二在临床临床意义方面：miR-302在近百例PTC和FTC中均明显升高，而其靶基因Trim24在近百例PTC和FTC中均明显降低，且其临床意义与肿瘤体积大小和患者的生存时间显著相关。因此得出结论：miR-302/Trim24轴在调节DTC发生碘耐受方面具有非常重要的作用，其机制与碘处理基因的表达和细胞内糖代谢密切相关。本研究阐明的机制可以为临床应对DTC发生碘耐受提供非常坚实的理论依据。