不同S1P受体在HDL相关的缺血心肌保护中的功能研究

近年来我国缺血性心脏病的发生率有增高趋势，心肌缺血的保护研究和如何应用于临床成为热点。本课题旨在探讨高密度脂蛋白（HDL）中的1-磷酸鞘氨醇（S1P）在缺血心肌保护中的作用，不同S1P受体在HDL相关心脏保护中的地位。提取和分离不同S1P含量的HDL组分，在体外应用成年小鼠心肌细胞和内皮细胞，采用细胞计数法、蛋白印迹法、SiRNA细胞转染法和定量PCR方法比较不同S1P含量的HDL组分处理组和对照组对缺氧细胞的保护作用，探讨不同S1P受体亚型的功效。在体内应用小鼠心肌梗死模型，采用心脏超声、蛋白印迹和免疫组织化学等方法，比较不同S1P含量的HDL组分处理组和对照组对心肌梗死面积、心功能和生存信号传导通路的影响。本课题希望证明S1P是HDL发挥缺血心肌保护的关键，分离富含S1P的HDL组分应用于缺血性心脏病的治疗，并且寻找到HDL作用靶点，为内科治疗缺血性心脏病提供新的思路和手段。

中文摘要. 【目的】近年来我国缺血性心脏病的发生率呈逐年增高趋势，心肌缺血的保护研究和如何应用于临床成为热点。本课题旨在探讨1-磷酸鞘氨醇（S1P）受体在高密度脂蛋白（HDL）的缺血心肌保护中的作用。     .【方法】 应用顺序密度超速离心方法和快速蛋白液相色谱层析法，提取和分离不同S1P含量的HDL组分，在体外培养成年小鼠心肌细胞，采用细胞计数法、蛋白印迹法、比较总HDL以及不同S1P含量的HDL组分处理组和对照组对缺氧细胞的保护作用，探讨不同S1P受体亚型的功效。在体内应用大鼠心肌梗死模型，应用不同浓度的S1P受体激动剂FTY720干预。采用即时PCR方法、蛋白印迹和免疫组化染色方法，比较S1P受体激动剂处理组和对照组对心肌凋亡和生存信号传导通路的影响。. 【结果】 HDL能够提高缺血状态下的心肌细胞存活率，能够激活MEK1/2-ERK1/2和PI3-K/AKT信号通路。HDL作用的强弱与S1P的含量成正相关，该作用能被S1P1/3受体拮抗剂VPC23019、Gi蛋白拮抗剂PTX、S1P3受体拮抗剂CAY10444所阻断。心肌梗死模型中应用S1P受体激动剂FTY720能够激活ERK和AKT抗凋亡信号通路，减少心肌细胞凋亡，减少心肌间质纤维化。.【结论】 HDL具有缺血心肌保护作用，通过S1P1和S1P3受体介导，激活ERK和AKT通路来完成。在心梗模型中，S1P受体激动剂FTY720同样具有缺血心肌保护作用。该作用可能与其上调S1P1和S1P3的受体表达水平，激活抗凋亡的AKT和ERK信号传导通路有关。