基于EP4-cAMP-PKA信号通路调控树突状细胞功能探讨二妙散对佐剂性关节炎的作用机制

Dendritic cells (DC) as a powerful antigen presenting cells, plays an important role in the pathogenesis rheumatoid arthritis (RA). Our previously research have found that PGE2-EP4-cAMP-PKA signaling pathways promote DC maturation and activation, and participated in abnormal inflammation in the adjuvant arthritis (AA). Ermiaosan (rhizoma atractylodis and cortex phellodendri equivalent compatibility) could effectively improve the AA rats. In clinical, Ermiaosan has been regared as a basis party for the treatment of RA, which belong to “arthralgia syndrome”. Berberine, the main active component of cortex phellodendri induced dendritic cell apoptosis and has therapeutic potential for arthritis. It showed that DC may be target cells of Ermiaosan. But its efficacy material basis and mechanism of action research is unclear. Therefore, based on the previous studies, in this project, establish adjuvant arthritis (AA) in rat, we detect the overall indicators to evaluate the therapeutic effects of Ermiaosan. Second, we adopted flow cytometry, QRT-PCR, western blot method, and discussed the effects of Ermiaosn on DCs function, whether by regulating the EP4-cAMP signaling pathways that affect DC maturation and activation. This may provide a scientific basis for revealing the anti-inflammatory effective parts of Ermiaosan for the treatment of AA and experimental foundation for clinical treatment of RA.

树突状细胞（DC）作为功能强大的抗原提呈细胞，在类风湿关节炎（RA）发病中起着重要作用。课题组前期研究发现，炎症介质PGE2可通过EP4-cAMP-PKA依赖的信号通路促进DC的成熟和活化，参与佐剂性关节炎（AA）大鼠异常炎症反应。清热燥湿经典复方二妙散可有效改善AA症状，临床常把其作为治疗RA等痹症的基础方，复方中黄柏主要成分小檗碱可通过诱导DC凋亡发挥对关节炎的治疗作用，提示DC可能为二妙散作用的靶细胞，但其药效物质基础及作用机制研究并不深入。本项目拟在前期工作基础上，建立AA大鼠模型，从整体角度观察二妙散不同溶剂萃取部位对AA的疗效，明确二妙散治疗AA的抗炎有效部位。进一步采用流式细胞术、免疫印迹等技术，观察这种疗效是否与改善DC功能相关，是否通过调节EP4-cAMP信号通路影响DC功能从而发挥治疗AA的作用，为揭示二妙散治疗AA的抗炎有效部位及临床治疗RA新的作用机制提供实验依据。

树突状细胞（DC）作为功能强大的抗原提呈细胞，在类风湿关节炎（RA）发病中起着重要作用。课题组前期研究发现，炎症介质PGE2可通过EP4-cAMP-PKA依赖的信号通路促进DC的成熟和活化，参与佐剂性关节炎（AA）大鼠异常炎症反应。清热燥湿经典复方二妙散可有效改善AA症状，临床常把其作为治疗RA等痹症的基础方，复方中黄柏主要成分小檗碱可通过诱导DC凋亡发挥对关节炎的治疗作用，提示DC可能为二妙散作用的靶细胞，但其药效物质基础及作用机制研究并不深入。本项目在前期工作基础上，采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇四种不同极性溶剂对二妙散水提物进行萃取，从整体角度观察二妙散不同溶剂萃取部位对AA的疗效，结果发现二妙散乙酸乙酯组可明显降低足肿胀度、关节肿胀数和多发性关节炎指数，改善关节病理变化，显著降低血清中TNFα、IL-1β和IL-6的水平，提高抗炎因子IL-10的产生。高效液相色谱分析结果表明，二妙散乙酸乙酯部位含有小檗碱和苍术素，提示乙酸乙酯部位可能为二妙散抗炎有效部位。进一步研究二妙散乙酸乙酯部位高中低三个剂量组对AA的疗效及作用机制，发现二妙散可改善脾脏和关节病理变化，显著降低FLS、B/T淋巴细胞的增殖反应。二妙散对AA大鼠外周血和骨髓源DC的异常活化具有显著的调控作用，可降低DC上CD40、CD80和CD86的表达和炎性细胞因子的分泌，也可以恢复DC上EP4/cAMP信号转导通路的异常。本研究明确了乙酸乙酯部位为二妙散抗炎有效部位，通过调节EP4/cAMP信号通路影响DC功能从而发挥治疗AA的作用，这为二妙散治疗AA的抗炎有效部位及临床治疗RA新的作用机制提供了实验依据。